MIO medium foundation, voorbereiding en gebruik

de halve MIO is een biochemische test die wordt gebruikt om te helpen bij het identificeren van soorten bacteriën die behoren tot de familie Enterobacteriaceae. Het is vrij voedzaam en bestaat uit glucose, gistextract, pepton, tripteïne, L-ornithine hydrochloride, broomcresol paars en agar.

De betekenis van het acroniem (MIO) beschrijft elk van de parameters die in dit medium kunnen worden waargenomen; motiliteit, indol en ornithine. Motiliteit is het vermogen van het micro-organisme om te bewegen door de aanwezigheid van flagellen. Om deze eigenschap te kunnen waarnemen, moet de consistentie van het medium halfvast zijn, zodat de bereiding minder agar bevat..

De indoolproductie is het bewijs van de aanwezigheid van het tryptofanase-enzym dat werkt op het aminozuur tryptofaan, omdat het noodzakelijk is om een ​​onthullend reagens te gebruiken om de productie van indool zichtbaar te maken.

Ten slotte bepaalt ornithine of de bacterie in staat is om het aminozuur te decarboxyleren, dat wil zeggen, als het het enzym orinithine decarboxylase heeft.

index

• 1 Foundation
  • 1.1 Pepton, gistextract en tripteïne
  • 1.2 Motiliteit
  • 1.3 Glucose
  • 1,4 L-ornithine
  • 1.5 pH-indicator
• 2 Zaai- en ontwikkelingstechniek
• 3 Voorbereiding
  • 3.1 MIO-medium
  • 3.2 Kovacs-reagens (Indool-testontwikkelaar)
• 4 Gebruik
• 5 kwaliteitscontrole
• 6 Referenties

stichting

Pepton, gistextract en tripteïne

Deze elementen dragen bij aan de voedingskracht van dit medium. Ze dienen als een bron van voedingsstoffen en essentiële aminozuren voor de ontwikkeling van bacteriën.

Bovendien is tripteïne een bron van tryptofaan om de aanwezigheid van het enzym tryptofanase aan te tonen, dat tryptofaan afbreekt door een reductieve deaminering die indool, pyrodruivenzuur, ammoniak en energie afgeeft..

Indool is kleurloos, dus de aanwezigheid wordt onthuld door toevoeging van vijf druppels Ehrlich of Kovacs-reagens, beide met p-dimethylaminobenzaldehyde.

De aldehydegroep van deze verbinding reageert met indol en genereert een ringvormig fuchsia-rood product op het agaroppervlak.

Elk spoor van kleur moet als positief bewijs worden beschouwd. De test moet onmiddellijk worden gelezen, omdat de kleur na verloop van tijd minder wordt.

Aan de andere kant moet deze test worden onthuld nadat de resultaten van motiliteit en decarboxylatie van ornithine zijn geregistreerd..

interpretatie

Positieve test: vorming van een fuchsia rode ring bij toevoeging van Kovacs reagensdruppels.

Negatieve test: er is geen ringvorming.

beweeglijkheid

Het vermogen van de bacteriën om te bewegen zal blijken als een troebel medium wordt waargenomen of als er een dikke lijn van groei is die zich uitbreidt rond de initiële inoculatie.

Een negatieve motiliteitstest zal worden aangetoond door het observeren van een dunne lijn van groei, en rondom zal er geen groei zijn.

Het is belangrijk dat de motiliteit wordt gelezen voordat de indole wordt onthuld, aangezien de toevoeging van het reagens het gehele medium vertroebelt.

In mobiele maar langzaam groeiende bacteriën is het moeilijk om hun beweeglijkheid met dit medium aan te tonen. In dit geval wordt het aanbevolen om andere tests of methoden te gebruiken, zoals het motiliteitsmedium of de drop-dropmethode.

glucose

Glucose is het fermenteerbare koolhydraat dat naast het leveren van energie het medium verzuurt, een noodzakelijke voorwaarde is voor de decarboxylatie van het aminozuur ornithine.

De fermentatie van glucose zou altijd moeten plaatsvinden, gebaseerd op het principe dat alle bacteriën die behoren tot de familie Enterobacteriaceae glucose fermenteren.

L-Ornithine

Als de bacterie het enzym ornithine-decarboxylase produceert, kan het in werking treden zodra het medium is aangezuurd door de fermentatie van glucose.

Het enzym ornithine decarboxylase werkt in op de carboxylgroep van het aminozuur en produceert een amine, putresine genoemd, dat het medium alkaliseert.

Deze test moet worden gelezen na 24 uur incubatie, omdat als u probeert te lezen voordat u de test verkeerd kunt interpreteren met een fout.

Er moet aan worden herinnerd dat de eerste reactie die optreedt de fermentatie van glucose is, zodat het medium in een eerste fase geel kleurt (eerste 10 tot 12 uur). Als de decarboxylatie van ornithine vervolgens optreedt, wordt het medium paars.

Het is belangrijk om de ornithine-decarboxylatie-test te interpreteren voordat indool wordt onthuld, omdat de toevoeging van Kovacs-reagens de kleur van het medium wijzigt.

interpretatie

Negatieve test: medium geel of met gele achtergrond.

Positieve test: helemaal paars.

PH-indicator

In dit geval wordt broomcresolpurple gebruikt; de persoon die de leiding heeft over onthullen wanneer er een pH-verandering in het midden is. Wanneer aangezuurd, wordt de indicator geel en wanneer alkalisch wordt paars.

Zaad en ontwikkelingstechniek

Om het MIO-medium te planten, wordt een rechte lus of naald gebruikt en daarmee wordt een deel van de te bestuderen kolonie verzameld..

Een diepe punctie wordt in het MIO-medium in een rechte lijn gemaakt. Het is niet aan te raden om een ​​dubbele lekke band uit te voeren, omdat dit een verkeerde motiliteitsafbeelding kan geven als de lekke banden niet op dezelfde plaats worden uitgevoerd.

Incubeer gedurende 24 tot 48 uur bij 37 ° C in aerobiose. Observeer de resultaten in deze volgorde: motiliteit, decarboxylatie van ornithine en uiteindelijk de indol.

Het is raadzaam om aseptisch 2 ml medium te nemen, het over te brengen naar een steriele buis en daar de indol-test uit te voeren, zodat als het negatief is, de rest van de oorspronkelijke buis 24 uur geïncubeerd kan worden om de indole opnieuw te onthullen..

De ontwikkeling van indol wordt op de volgende manier uitgevoerd: 3 tot 5 druppels van het Kovacs-reagens worden aan het MIO-medium toegevoegd en krachtig geroerd. Er wordt waargenomen of een fuchsia rode ring verschijnt of niet.

voorbereiding

Halve MIO

Weeg 31 gr MIO-medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water.

Verwarm tot het mengsel een minuut kookt, en roer regelmatig totdat de agar volledig is opgelost. Verdeel 4 ml van het medium in 13/100 reageerbuisjes met katoenen deksel.

Steriliseer in een autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Verwijder uit de autoclaaf en laat het recht in een rek staan, zodanig dat een halfvast blok wordt gevormd.

Bewaren in de koelkast 2-8 ° C. Laten temperen voordat de bacteriestam wordt geplant.

De kleur van het gedehydrateerde medium is beige en die van het medium is enigszins paars opalescent.

De uiteindelijke pH van het bereide medium is 6,5 ± 0,2

Het medium wordt geel met zure pH en is paars bij alkalische pH.

Kovacs-reagens (Indool-testontwikkelaar)

Dit reagens wordt als volgt bereid:

150 ml amyl, isoamyl of butylalcohol (elk van de drie) wordt gemeten. Daarin wordt 10 g p-dimethylaminobenzaldehyde opgelost. Vervolgens wordt langzaam 50 ml geconcentreerd zoutzuur toegevoegd.

Het bereide reagens is kleurloos of lichtgeel. Het moet in een amberkleurige fles worden bewaard en in de koelkast worden bewaard. Een donkerbruine kleur vertoont zijn achteruitgang.

Ook kan het Kovacs-reagens worden vervangen door het Ehrlich-reagens. De laatste, die gevoeliger is, heeft de voorkeur om indool te onthullen in bacteriën die het produceren in minimale hoeveelheden, zoals in sommige Gram-negatieve niet-fermenterende bacillen en bepaalde anaëroben.

gebruik

Dit medium is een test die complementair is aan een reeks biochemische tests voor de identificatie van bacteriën die behoren tot de familie Enterobacteriaceae.

De de-carboxyleringsgegevens van ornithine dienen om te differentiëren Shigella sonnei, dat geeft positief, van Shigella boydii, Shigella flexneri en S. dysenterieae, die negatieven geven.

Het differentieert ook het geslacht Klebsiella, dat negatief is, het geslacht Enterobacter, waar de meeste soorten positief zijn.

Kwaliteitscontrole

Telkens wanneer een partij MIO-medium wordt voorbereid, kan een controletest worden uitgevoerd. Hiervoor worden bekende of gecertificeerde stammen gebruikt om het gedrag van het medium te observeren.

De soorten die kunnen worden gebruikt zijn Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes en Proteus mirabilis.

De verwachte resultaten zijn E. coli en M. morganii. Dan M: +, I: + en O: +.

Klebsiella pneumoniae geeft alle negatieve (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis en Enterobacter aerogenes dan M: + I: - en O: +.

referenties

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemische tests voor de identificatie van bacteriën van klinisch belang. 3e druk Redactioneel Panamericana. Buenos Aires Argentinië.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
4. Laboratoria Britania. MIO Medio 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
5. BD Laboratories BBL Motiliteit Indool Ornithine (MIO) Medium. 2007. Beschikbaar op: bd.com
6. Valtek Laboratories Medium M.I.O. Motiliteit, indool, ornithine. 2010. Beschikbaar op: andinamedica.com