Half SIM-foundation, voorbereiding en gebruik

de halve SIM Het is een halfvaste en differentiële agar, speciaal ontworpen om de identificatie van enkele bacteriën te helpen, voornamelijk van de familie Enterobacteriaceae. Het is samengesteld uit tripteïne, pepton, ijzersulfaat, ammoniumsulfaat, natriumthiosulfaat en agar.

Met dit medium kunnen drie belangrijke tests worden uitgevoerd: de productie van waterstofsulfide (H.₂S), indolvorming en beweeglijkheid, vandaar het acroniem SIM. Vanwege zijn grote bruikbaarheid kan het niet ontbreken in een bacteriologisch laboratorium.

In tegenstelling tot andere media, moet deze halfvast zijn, zodat de bewegingscapaciteit van sommige bacteriën detecteerbaar is. In deze zin is deze test werkt zeer goed voor Enterobacteriaceae, maar niet in niet-fermentatieve gramnegatieve staafjes, waarbij het de voorkeur om andere werkwijzen, zoals de opknoping neerzetten.

Het SIM-medium maakt het mogelijk om bepaalde specifieke eigenschappen die sommige bacteriën kenmerken te onderscheiden van anderen. Bijvoorbeeld Escherichia coli het onderscheidt zich door H te zijn₂S (-), Indool (+) en beweeglijkheid (+), terwijl Proteus mirabilis het is H₂S (+), indol (-), beweeglijkheid (+).

index

• 1 Foundation
  • 1.1 Stroombron
  • 1.2 Productie van waterstofsulfide
  • 1.3 Indoolvorming
  • 1.4 Motiliteit
• 2 Voorbereiding
  • 2.1 Halve SIM
  • 2.2 Kovac's reagens
  • 2.3 Erlich reagens
• 3 Gebruik
  • 3.1 Gezaaid
• 4 Kwaliteitscontrole
• 5 Beperkingen
• 6 Referenties

stichting

Het is een kweekmedium dat als differentieel wordt beschouwd, omdat het erin slaagt onderscheid te maken tussen micro-organismen die waterstofsulfide kunnen produceren en die welke dat niet doen; markeert ook diegenen die indool vormen uit het tryptofaan van degenen die het niet vormen, en ten slotte het beweeglijke onderscheidt van de immobiele bacteriën.

Stroombron

Zoals elk kweekmedium, heeft het elementen die de noodzakelijke voedingsstoffen verschaffen zodat niet-veeleisende micro-organismen zich kunnen ontwikkelen. Deze elementen worden weergegeven door de peptonen en tripteína.

De ontwikkeling van het micro-organisme in de omgeving is essentieel om de aanwezigheid of afwezigheid van de door dit medium geëvalueerde kenmerken te kunnen observeren.

Productie van waterstofsulfide

De letter S van het acroniem SIM verwijst naar de productie van waterstofsulfide (H.₂S). Bacteriën die waterstofsulfide kunnen vormen, nemen de zwavel van natriumthiosulfaat.

Zodra de H is gevormd₂S - kleurloze gassen - dit reageert met het ijzerzout dat in het medium aanwezig is en vormt ijzersulfide, duidelijk zichtbaar (zwart neerslag). Bacteriën die geen H vormen₂S, laat het midden van de originele kleur (beige).

De aanwezigheid van het zwarte neerslag kan de interpretatie van de beweeglijkheid belemmeren. Het is echter bekend dat de meerderheid van de H-producerende enterobacteriën₂S zijn positieve motiliteit, zoals Salmonella, Proteus en Citrobacter. Bovendien suggereert het zwarte neerslag dat bijna het gehele medium bedekt, positieve motiliteit.

Indole training

De tweede letter van het acroniem SIM is de "I", die de vorming van indool vertegenwoordigt.

In die zin vervult tripteína, naast dat het een bron van voedingsstoffen is, nog een andere fundamentele functie. Dit pepton is rijk aan een aminozuur dat tryptofaan wordt genoemd en daarom kan het de bacteriën laten zien die tryptofanase produceren.

Dit enzym is verantwoordelijk voor het splitsen van het aminozuur tryptofaan, met als gevolg vorming van indool (kleurloze stof), pyrodruivenzuur en ammoniak.

Daarom is het voor de demonstratie van deze reactie noodzakelijk om een ​​onthullende stof (Ehrlich-reagens of Kovac's reagens) toe te voegen. Ofwel één reageert met de indol en vormt een ringvormige rood-fuchsia-substantie op het oppervlak van de agar. Als de fuchsia-ring verschijnt, wordt de indol-test als positief geïnterpreteerd.

Bacteriën die dit enzym niet hebben, vormen geen ring en worden geïnterpreteerd als een negatieve indooltest.

Belangrijkste is dat de indol proef laatste uitgelegd keer toegevoegd reagens, het medium troebel voorkomen weergave van motiliteit.

beweeglijkheid

Uiteindelijk betekent de letter "M" van het woord SIM motiliteit. Om de beweeglijkheid te kunnen beoordelen, is dit medium strategisch halfvast, omdat dit kenmerk essentieel is om te kunnen waarnemen of er bacteriële beweging is of niet. De bacteriën met flagellen zijn die die deze positieve test geven.

Een positieve test zal duidelijk zijn wanneer troebelheid wordt waargenomen, zowel in het initiële inoculum als er omheen. Hoewel niet-mobiele bacteriën zich alleen in het initiële inoculumpad ontwikkelen.

voorbereiding

Halve SIM

Weeg 30 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Men laat het mengsel 5 minuten staan ​​en kookt vervolgens tot koken onder regelmatig roeren totdat het volledig is opgelost..

Verdeel het mengsel in reageerbuizen met een katoenen deksel en laat het 15 minuten in een autoclaaf staan ​​bij 121 ° C. Verwijder het buisrek uit de autoclaaf en laat het stollen in een rechtopstaande positie, zodat het medium in de vorm van een blok is..

Voor opslag wordt het bewaard in de koelkast totdat het wordt gebruikt. Het bereide medium moet een uiteindelijke pH van 7,3 ± 0,2 hebben.

Op het moment dat het medium wordt geïnoculeerd, moet het op kamertemperatuur zijn. De kleur van het medium is beige.

Kovac's reagens

Meet 150 ml amyl of isoamyl of butylalcohol. (Gebruik een van de drie genoemde).

Los 10 g p-dimethylaminobenzaldehyde op. Voeg daarna langzaam 50 ml geconcentreerd zoutzuur toe.

Het reagens gereed voor gebruik is kleurloos of lichtgeel. Het moet in een amberkleurige fles worden bewaard en in de koelkast worden bewaard. Niet gebruiken als het een donkerbruine kleur heeft; dat geeft aan dat het beschadigd is. Dit reagens heeft de voorkeur als het gaat om enterobacteriën.

Erlich-reagens

Weeg 2 g p-dimethylaminobenzaldehyde af en los op in 190 ml absolute ethylalcohol en meng langzaam met 40 ml geconcentreerd zoutzuur. Houd het reagens van Kovac op dezelfde manier. Ehrlich-reagens wordt meer gebruikt voor niet-fermenterende en anaerobe bacteriën.

toepassingen

Het SIM-medium wordt vooral gebruikt in bacteriologische laboratoria. Het heeft als een voordeel dat in dezelfde buis drie essentiële kenmerken kunnen worden waargenomen bij de identificatie van Enterobacteriaceae.

geplant

De juiste manier om dit medium te planten wordt met de naald, waarmee een gedeelte genomen zuivere kolonie bestuderen en die in het centrum van de halve verticaal. Er moet een enkele stoot worden gemaakt. De punctie mag de onderkant van de buis niet bereiken, het goede ding is om slechts twee derde van de diepte te bedekken.

Het is niet aan te raden het inoculum te herhalen, omdat dit kan leiden tot valse interpretaties van positieve motiliteit. Het geënte medium wordt gedurende 24 uur bij 37 ° C geïncubeerd in aerobiose.

Afgesloten de tijd waarop wordt waargenomen of er wel of geen H-productie was₂S en motiliteit worden gelezen. Uiteindelijk wordt de indole onthuld, en voegt 3 tot 4 druppels Ehrlich of Kovac's reagens toe, het wordt voorzichtig gemengd en geïnterpreteerd.

Kwaliteitscontrole

Als een steriliteitscontrole worden één of twee buizen geïncubeerd zonder inoculatie in een oven bij 37 ° C gedurende 24 uur. Er wordt verwacht dat na deze tijd er geen groei of verandering van kleur zal zijn.

Als kwaliteitscontrole kunnen gecertificeerde bekende stammen worden gebruikt, zoals: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

De verwachte resultaten zijn: Escherichia coli H₂S negatief, indol en positieve beweeglijkheid, Enterobacter aerogenes alleen positieve motiliteit, Salmonella typhimurium H₂S en positieve beweeglijkheid, met negatieve indol. Proteus vulgaris allemaal positief, terwijl Klebsiella pneumoniae en Shigella sonnei allemaal negatief.

beperkingen

-Sommige stammen van Morganella morganii, onder andere stammen kunnen in dit medium een ​​bruinachtig pigment produceren vanwege de productie van melanine, dit moet niet worden verward met het neerslag van ferrosulfide. Bij onervaren professionals kan deze situatie valse positieven genereren bij de interpretatie van de H-test₂S.

-Strikte aerobe bacteriën zullen alleen op het oppervlak van de buis groeien, waardoor het moeilijk is de motiliteit te interpreteren.

referenties

1. BD Laboratories BBL SIM Medium. 2008. Beschikbaar op: bd.com
2. Neogen Laboratories SIM-medium. Verkrijgbaar bij: foodafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM-medium. 2009. Beschikbaar op: http://f-soria.es
4. Brizuela-Lab Laboratorium SIM-medium. Beschikbaar op: .brizuela-lab.com
5. Laboratoria Britania. SIM-medium. 2015. Beschikbaar bij: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.