Voorbereiding van kweekmedia waar het uit bestaat, doelstellingen en stappen

de bereiding van kweekmedia Het is een routinemethode die in laboratoria wordt gebruikt voor de groei van gewenste micro-organismen. De kweekmedia zijn vaste, vloeibare of halfvaste preparaten die alle voedingsstoffen bevatten die nodig zijn voor de ontwikkeling van een microbiële populatie.

In het algemeen zijn de middelen voor het kweken van micro-organismen rijk aan eiwitten en aminozuren en bevatten ze meestal een component die de groei van het organisme begunstigt dat u wilt bestuderen, zoals vitamines, bloed, serum, onder anderen..

Er is geen algemeen of universeel kweekmedium, aangezien de samenstelling ervan varieert afhankelijk van de behoeften van het micro-organisme van belang. Sommige bacteriën kunnen zich in elk kweekmedium ontwikkelen, maar andere hebben speciale vereisten.

index

• 1 Waar bestaat het uit??
  • 1.1 Agar
  • 1.2 Vloeistoffen
  • 1.3 Extracten
  • 1,4 Peptonen
  • 1.5 Schokdempers
• 2 doelstellingen
• 3 soorten media
  • 3.1 Op basis van zijn samenstelling
  • 3.2 Gebaseerd op het type micro-organisme
• 4 stappen
• 5 Referenties

Waar bestaat het uit??

Micro-organismen, zoals schimmels en bacteriën, kunnen niet individueel worden onderzocht vanwege hun kleine formaat. Daarom moeten ze worden gekweekt op kunstmatige manieren die een aanzienlijke toename van de bevolking mogelijk maken.

Als we bijvoorbeeld bacteriën willen bestuderen, moeten we hen voorzien van de juiste omstandigheden, zodat ze zich kunnen vermenigvuldigen en een kolonie vormen (die met het blote oog kan worden waargenomen).

De bereiding van de kweekmedia varieert sterk afhankelijk van het type micro-organisme dat men wenst te cultiveren. Alvorens het voor te bereiden, is het noodzakelijk om de elementaire voedingsbehoeften van het oeuvre te kennen.

Vervolgens worden de meest voorkomende componenten die in kweekmedia worden gebruikt, beschreven als een algemeen idee van hun voorbereiding:

agar-agar

Het wordt gebruikt in gewassen als een geleermiddel en wordt toegevoegd bij het zoeken naar een vast of halfvast medium. Het eerste stollende middel dat werd gebruikt bij de bereiding van media was gelatine, maar in het jaar 1883 werd agar geïntroduceerd in de bacteriologische wereld door W. Hesse..

Bacteriologische agar heeft als hoofdcomponent een polysaccharide van complexe vertakkingen die zijn geëxtraheerd uit algen. Deze verbinding wordt gebruikt als verdikkingsmiddel voor veel voorkomende voedingsmiddelen zoals ijs en jam.

Het is om verschillende redenen een zeer waardevol element in de microbiologie. Vooral omdat de micro-organismen het niet kunnen afbreken, vloeibaar worden bij een temperatuur van 100 ° C en in een vloeibare toestand blijven tot ze 45 ° C of minder bereiken.

Als u een vast medium wilt bereiden, moet de agarconcentratie ongeveer 1,5% zijn, terwijl de semi-vaste stoffen moeten worden bereid van 0,3 tot 0,5%.

vloeistoffen

Het kweken van pathogene organismen vereist lichaamsvloeistoffen, zodat ze zich kunnen ontwikkelen zoals ze zouden doen in hun natuurlijke omgeving. Om deze reden wordt geheel of gedefibrilleerd bloed toegevoegd. De vloeistof wordt geëxtraheerd uit een gezond dier en, eenmaal gesteriliseerd, wordt toegevoegd aan het kweekmedium.

uittreksels

Ze worden verkregen uit verschillende dierlijke delen (zoals vlees of lever) of groenten (zaden) en verwerkt tot een vast concentraat in de vorm van pasta of poeder. De meest voorkomende zijn gist, mout en vlees.

Peptonas

Deze organische verbindingen worden verkregen door enzymatische of chemische hydrolyse van dierlijke of plantaardige weefsels. Het doel is om inhoud toe te voegen die rijk is aan aminozuren, die de fundamentele eenheden van eiwitten zijn.

Schokdempers

De buffers of buffersystemen vermijden plotselinge pH-veranderingen en helpen het optimale bereik te behouden dat het lichaam tolereert.

De meeste organismen kunnen zich goed ontwikkelen bij een pH van 7, hoewel sommige bacteriën de voorkeur geven aan alkalische media. Er zijn echter bacteriën die pH-variaties tussen de waarden van 6 en 9 weerstaan.

Bij soorten die gevoelig zijn voor pH, wordt de schade niet veroorzaakt door de overmatige hoeveelheid waterstof of hydroxylionen, maar door de toename van zwakke zuren of basen die de cel kunnen binnendringen.

Ook worden indicatoren toegevoegd om de pH te bewaken en afwijkingen door fermentatie of andere processen te voorkomen.

doelstellingen

Het hoofddoel bij het voorbereiden van een kweekmedium is om alle noodzakelijke componenten toe te voegen om de succesvolle ontwikkeling van het organisme dat geïsoleerd wil worden mogelijk te maken. De meest effectieve combinatie van componenten en voedingsstoffen moet worden geïdentificeerd om het gewenste medium te bereiken.

Zowel de voorbereiding als de opslag van het medium zijn van cruciaal belang voor een succesvolle groei, omdat deze stappen afhankelijk zijn van de samenstelling van de omgeving en de beschikbaarheid van voedingsstoffen.

Er moet rekening worden gehouden dat de kweek van micro-organismen een taak is die wordt beïnvloed door verschillende factoren buiten het kweekmedium, zoals de intensiteit van ontvangen licht, temperatuur en niveau van zuurgraad of alkaliteit van het medium. Daarom moet elk van deze variabelen in aanmerking worden genomen.

Typen media

Gebaseerd op zijn samenstelling

Op basis van zijn samenstelling zijn er drie hoofdtypen van gewassen: natuurlijke of empirische, semi-synthetische en gedefinieerde synthetische of chemische middelen.

Natuurlijke omgeving

In natuurlijke omgevingen is de exacte samenstelling onbekend. Deze omvatten ingrediënten zoals melk, verdund bloed, groentesappen, extracten en infusies van vlees en pepers. Om economische redenen worden vaak goedkope componenten toegevoegd, zoals soja-extract, wei, melasse, enz..

Semi-synthetische media

Het wordt semi-synthetisch medium genoemd als de samenstelling ervan gedeeltelijk bekend is. Elk medium dat agar bevat, wordt een semi-synthetisch medium.

Onder hen aardappel dextrose agar, Czapek-Dox agar, havermeelagar, vleespepton agar, onder andere voorbeelden.

Synthetisch of chemisch gedefinieerd medium

In dit geval is de samenstelling van het medium - in termen van de hoeveelheid koolstof, stikstof, zwavel, fosfor en alle andere bronnen van groeifactoren - volledig bekend. Het is erg handig als u reproduceerbare resultaten wilt verkrijgen voor andere onderzoekers.

Voor de zogenaamde "micro-organismen met speciale groei-eisen" is het noodzakelijk om de nodige componenten toe te voegen. Een voorbeeld van dit type zijn de Lactobacillus.

Gebaseerd op het type micro-organisme

Evenzo is er een andere classificatie voor kweekmedia op basis van het type micro-organisme dat erin kan groeien. Volgens dit principe hebben we de volgende algemene middelen voor verrijking, selectief en differentieel. Elk wordt hieronder beschreven:

Algemeen betekent

Deze laten de ontwikkeling toe van een grote verscheidenheid aan micro-organismen. Als een organisme speciale omstandigheden nodig heeft voor zijn groei, kan het zich niet goed ontwikkelen in dit type gewas.

Verrijking betekent

De middelen voor verrijking begunstigen de groei van een bepaald type micro-organisme, maar er is geen stof toegevoegd om te voorkomen dat andere soorten microben daarin groeien..

Selectieve media

Ze zoeken naar de specifieke groei van een micro-organisme, noemen het schimmels, bacteriën, protozoa, onder anderen. Om dit te doen, remmen ze de ontwikkeling van anderen af.

Om dit doel te bereiken kunnen dodelijke chemische verbindingen worden toegevoegd voor een grote groep micro-organismen en onschadelijk zijn voor het van belang zijnde organisme of voor het toevoegen van energiebronnen die alleen kunnen worden geassimileerd door de gezochte microbe..

Selectieve media worden gebruikt bij het nemen van medische monsters om een ​​pathogeen micro-organisme te laten groeien. Hier is het noodzakelijk om de groei van het pathogeen te begunstigen en de ontwikkeling van de normale microbiële flora van de patiënt te remmen.

Bismut-sulfiet-agar bijvoorbeeld, staat de groei van gram-positieve bacteriën en een groot aantal bacteriën in de gastro-intestinale holte niet toe. Daarom wordt het gebruikt voor het kweken van de gram-negatieve bacteriën die buiktyfus veroorzaken, Salmonella typhi in fecale monsters.

Differentiële media

Dit type maakt gebruik van een diagnostisch kenmerk van het organisme van belang (bijzonderheden in het metabolisme ervan bijvoorbeeld) om ze te kunnen identificeren tegen een andere soort die in dezelfde omgeving groeit.

Zowel de differentiële media als de selectieve media zijn zeer nuttig op het gebied van klinische microbiologie en volksgezondheid, omdat deze disciplines de aanwezigheid van specifieke micro-organismen moeten detecteren die verband houden met slechte hygiënische omstandigheden of omstandigheden..

Aan het gewas kunnen indicatiestoffen worden toegevoegd die een onderscheidend kenmerk geven aan de gewenste kolonie. Het agar-eosine-methyleenblauw (afgekort EMB) en het MacConkey-agar worden bijvoorbeeld toegevoegd met lactose en een pH-indicator.

Dus, wanneer een kolonie wordt ontwikkeld in deze media met het vermogen om lactose te fermenteren en aldehyden te produceren, kunnen ze worden waargenomen in een speciale kleur.

stappen

Momenteel kunnen de kweekmedia worden gekocht in gelyofiliseerde vorm. Daarom is de bereiding gefaciliteerd en is alleen het product gerehydrateerd. De inhoud moet worden afgewogen (rekening houdend met de uiteindelijke gewenste hoeveelheid te bereiden) en opgelost in gedestilleerd water na alle indicaties van het product.

De inhoud van de vloeibare media moet worden verdeeld in de gewenste houders (petrischalen, buizen, enz.) Voor daaropvolgende sterilisatie. Voor het verdelen van het vaste medium is het noodzakelijk om het te smelten met een magnetron of door het materiaal te onderwerpen aan een waterbad. De pH van het medium moet worden aangepast.

Gewoonlijk wordt de agar gebruikt in reageerbuizen of in Petrischalen. Als de agar stolt in een hellende positie, met de juiste hoek zodat de laatste eindrand diagonaal is, staat deze opstelling bekend als fluitpiek of hellende buizen. Wanneer de agar in een volledig verticale positie stolt, wordt hij "diep" genoemd.

Na sterilisatie van de media - met behulp van een autoclaaf - mogen ze afkoelen. Deze moeten worden behandeld in een omgeving die vrij is van micro-organismen, de meest voorkomende is om te werken met een aangestoken aansteker die zorgt voor een aseptische omgeving in de buurt.

referenties

1. Celis, J. E. (2006). Celbiologie: een laboratoriumhandboek (Deel 2). Elsevier.
2. Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S.M., & Scott, E.G. (1991). Bailey Scott: microbiologische diagnose. Pan American Medical.
3. Olivas, E. (2004). Handleiding van Practices of Microbiology I en II en Parasitology. Autonome universiteit van Ciudad Juárez.
4. Schlegel, H.G., & Zaborosch, C. (1993). Algemene microbiologie. Cambridge University Press.
5. Tortora, G. J., Funke, B.R., & Case, C.L. (2007). Inleiding tot de microbiologie. Ed. Panamericana Medical.