Baird Parker Agar foundation, voorbereiding en gebruik

de Baird Parker agar het is een vast, selectief en differentieel kweekmedium. Het werd in 1962 gemaakt voor de detectie en coagulase-positieve Staphylococcus-telling (Staphylococcus aureus).

Het is samengesteld uit caseïne-pancreashydrolysaat, vleesextract, gistextract, lithiumchloride, glycine, natriumpyruvaat, kaliumtelluriet, agar en eigeelemulsie.

Baird Parker agar is gebaseerd op het vermogen van de S. aureus van het verminderen van telluriet en het produceren van lecithinase. Beide eigenschappen genereren een kolonie met specifieke kenmerken voor deze soort. Daarom biedt het grote effectiviteit bij de detectie van dit micro-organisme.

De typische kolonies van S. aureus ze zijn zwart of donkergrijs, met een kleurloze rand en een heldere halo die hen omringt, waarbij ze zichzelf onderscheiden van de rest van de micro-organismen. Dit pathogeen kan worden gevonden in klinische monsters, water, cosmetica en rauw of gekookt voedsel.

De diagnose of detectie ervan is erg belangrijk, vanwege de verscheidenheid aan pathologieën die het produceert, zoals voedselvergiftiging, scalded skin syndrome, toxisch shocksyndroom, abcessen, meningitis, septikemie, endocarditis, onder anderen..

index

• 1 Foundation
  • 1.1 Voeding
  • 1.2 Selectief
  • 1.3 differentieel
• 2 Voorbereiding
  • 2.1 Eierdooieremulsie
  • 2.2 Potassiumtelluriet op 1% g / v
  • 2.3 Bereiding van het kweekmedium
• 3 Gebruik
  • 3.1 Klinische monsters
  • 3.2 Voedingsmonsters
  • 3.3 Watermonsters
• 4 Kwaliteitscontrole
• 5 Aanbevelingen
• 6 Referenties

stichting

Voedzame kracht

Caseïne pancreashydrolysaat, vleesextract en gistextract zijn de bronnen van voedingsstoffen, vitamines en mineralen die nodig zijn voor algemene microbiële ontwikkeling, terwijl pyruvaat en glycine verbindingen zijn die de specifieke groei van Staphylococcus aureus.

selectief

Baird Parker agar is selectief omdat het stoffen bevat die de groei van de bijbehorende flora remmen, terwijl het de ontwikkeling van S. aureus. De remmende verbindingen zijn lithiumchloride en kaliumtelluriet.

differentiaal

Dit betekent dat het mogelijk is om te differentiëren S. aureus van de rest van de coagulase-negatieve stafylokokken. S. aureus heeft het vermogen om telluriet te reduceren tot zwart metaalvrij tellurium, en vormt zwarte of donkergrijze kolonies.

Ook de dooier verschaft de substraten om de aanwezigheid van de lecithinase en lipase-enzym tonen. S. aureus positief lecithinase en dus een duidelijke halo rond de kolonies werden waargenomen, wat aangeeft dat gehydrolyseerd lecithine.

In dit verband is de verschijning in deze agar heldere donker zwart of grijs kolonies met duidelijke halo rond wijzen op de aanwezigheid van S. aureus. 

Als een precipitatiezone wordt gevormd, is dit een aanwijzing dat er lipase-activiteit is. Sommige stammen van S. aureus ze zijn positief lipase en andere negatief.

In het geval dat de S. aureus Als de lipase positief is, wordt een ondoorzichtig gebied rond de zwarte of donkergrijze kolonie waargenomen en vervolgens de heldere halo als gevolg van de werking van lecithinase..

Kolonies van andere bacteriën dan S. aureus in staat zijn om te groeien in dit medium zullen kleurloze of bruine kolonies ontwikkelen, zonder halo rond.

Atypische zwarte kolonies kunnen ook worden waargenomen met of zonder een kleurloze rand, maar zonder een heldere halo. Deze kolonies moeten niet in aanmerking worden genomen, ze komen niet overeen met S. aureus.

voorbereiding

Eidooieremulsie

Neem een ​​vers kippenei, was het goed en plaats het 2 tot 3 uur in 70% alcohol. Vervolgens opent het ei aseptisch en wordt het eiwit voorzichtig gescheiden van de dooier. Daarna wordt 50 ml van de dooier genomen en gemengd met 50 ml steriele fysiologische oplossing.

Kaliumtelluriet op 1% g / v

Sommige commerciële huizen verkopen 1% kaliumtelluriet gebruiksklaar. Het wordt toegevoegd aan het medium voordat het medium stolt.

Om deze oplossing in het laboratorium te bereiden weeg 1,0 g kaliumtelluriet en los op in een deel van het water. Vervolgens wordt de hoeveelheid water tot 100 ml aangevuld. De oplossing moet worden gesteriliseerd met behulp van de filtratiemethode.

Bereiding van kweekmedium

Weeg 60 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 940 ml gedestilleerd water. Laat het mengsel ongeveer 5 tot 10 minuten rusten.

Breng warmte aan door het medium regelmatig te roeren om het oplossingsproces te verbeteren. Laat het een minuut koken. Steriliseer in de autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C.

Laten staan ​​tot het een temperatuur van 45 ° C bereikt en voeg 50 ml van de eigeelemulsie en 10 ml 1% telluriet toe. Meng goed en serveer 15 tot 20 ml op steriele petrischalen.

Laten stollen, in vakjes omgekeerd bestellen en tot gebruik in de koelkast bewaren.

De uiteindelijke pH van het bereide medium moet 6,8 ± 0,2 zijn.

Wacht voordat u een monster plant, totdat de plaat de omgevingstemperatuur heeft bereikt. Zaai de platen plat of met een Drigalski-spatel op het oppervlak.

De kleur van het gedehydrateerde medium is lichtbruin en de kleur van het bereide medium is licht amberkleurig.

gebruik

Klinische monsters

Klinische monsters worden direct geënt door een deel van het materiaal aan één uiteinde van de plaat af te geven en van daaruit striaat het door uitputting. Incubeer gedurende 24 tot 48 uur bij 35-37 ° C.

Voedsel monsters

Weeg 10 g van het voedselmonster af en homogeniseer in 90 ml 0,1% gepeptoneerd water, verdunningen worden zonodig van daaruit bereid. Inoculeer de platen in drievoud met 0,3 ml van de bereide oplossingen en zaai op het oppervlak met een Drigalski-spatel. Incubeer gedurende 24 tot 48 uur bij 35-37 ° C.

Deze methode maakt het mogelijk om de verkregen typische kolonies te tellen en is ideaal wanneer de aanwezigheid van S. aureus boven 10 CFU per g / ml monster.

Als u vermoedt dat de hoeveelheid S. aureus het is klein of er is veel van de bijbehorende flora, het wordt voorgesteld om het monster te verrijken in tripticase sojabouillon met 10% NaCl en 1% natriumpyruvaat. Dit zal de groei van bevorderen S. aureus en zal de ontwikkeling van de bijbehorende flora remmen. Buizen die troebel zijn, worden gezaaid op Baird Parker agar.

Watermonsters

In een vacuümfiltratiesysteem en gesteriliseerd, wordt 100 ml water gefilterd en vervolgens wordt het microporeuze membraan van 0,4 micron verwijderd met een steriele klem en op een Baird Parker-plaat geplaatst. Incubeer gedurende 24 tot 48 uur bij 35-37 ° C. Deze techniek maakt het tellen van typische kolonies van S. aureus.

Kwaliteitscontrole

Om de kwaliteit van Baird Parker-agar te beoordelen, kunnen bekende stammen worden gebruikt, zoals Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 of Proteus mirabilis ATCC 43071.

In het geval van stammen van S. aureus Van ATCC is bekend dat het het telluriet vermindert en het zijn positieve lipasen en lecithinase. Daarom moet er een bevredigende ontwikkeling zijn en convexe kolonies groeien met een zwart centrum en een kleurloze rand, met een ondoorzichtige halo en nog een halo meer uitwendig helder.

Aan de andere kant, S. epidermidis In dit medium wordt een slechte ontwikkeling verwacht, met grijsachtig bruine tot zwarte kolonies, geen heldere halo.

naar E. coli en P. mirabilis er wordt verwacht dat deze geheel of gedeeltelijk wordt geremd. In het geval van groei zullen zich bruine kolonies ontwikkelen zonder ondoorzichtige zone, noch heldere halo.

aanbevelingen

-Het medium mag niet worden verwarmd na toevoeging van het telluriet en de dooier.

-De bereiding van de eigeelemulsie en de toevoeging ervan in het medium is een zeer kwetsbare vervuilingsstap. Uiterste zorg moet worden genomen.

-Als er typische kolonies zijn van S. aureus moet worden bevestigd door een coagulase-test op de genoemde stam uit te voeren.

-Als er twijfelachtige resultaten zijn met coagulase, moeten andere bevestigingstests worden uitgevoerd.

-Zorg dat je de aanwezigheid van typische kolonies van niet verwart S. aureus met de atypische kolonies van zwarte kleur.

referenties

1. Bijdragers van Wikipedia. Baird-Parker agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 15 maart 2017, 19:36 UTC. Beschikbaar op: wikipedia.org/ Betreden 18 februari 2019.
2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Beschikbaar op: bd.com
3. Laboratoria Britania. Baird Parker agar-basis. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Beschikbaar op: http://f-soria.es/Inform
5. Laboratoria Britania. Potassium telluriet. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Carrying Staphylococcus aureus enterotoxigene type A, in nasofaryngeale uitstrijkjes in voedselbehandelaars. Rev Med Chili 2017; 145: 1559-1564
7. Venezolaanse standaard Covenin 1292-89. (1989). Food. Isolatie en tellen Staphylococcus aureus. Verkrijgbaar in:sencamer.gob.ve