Agar BHI foundation, voorbereiding en gebruik



de BHI agar of Brain Heart Infusion-agar is een voedzaam, vast kweekmedium. In het Spaans noemen we het hersen-hartinfusie-agar. Het is een niet-selectief kweekmedium, wat betekent dat alle soorten Gram-positieve en Gram-negatieve bacteriën kunnen worden ontwikkeld, evenals enkele gist- en filamenteuze schimmels.

Het bestaat uit hersen-hart-infusie rundvlees, peptische hydrolysaat van dierlijk weefsel, pancreas caseïnehydrolysaat, natriumchloride, glucose, dinatriumfosfaat en agar.

Opgemerkt moet worden dat BHI-agar een van de meest voorkomende kweekmedia is in bacteriologische laboratoria. Het kan zonder supplementen worden gebruikt als primaire cultuur, subcultuur van kolonies verkregen in andere selectieve media of voor het onderhoud van stammen in het laboratorium.

Aan de andere kant is het een ideaal medium om te worden gebruikt als een basis bij de bereiding van verrijkte media, zoals bloedagar en chocolade-agar. Beide ideaal om veeleisende micro-organismen te isoleren vanuit het oogpunt van voeding. Er moet echter rekening mee worden gehouden dat glucose, aangezien het glucose bevat, niet adequaat is om de patronen van hemolyse waar te nemen.

Evenzo kan BHI-agar worden gebruikt voor de bereiding van speciale middelen voor de isolatie van pathogene micro-organismen met moeilijke groei in gebruikelijke media, waaronder: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae en Histoplasma capsulatum.

Met het antibioticum-additief wordt BHI agar een selectief medium voor de isolatie van schimmels.

index

  • 1 Foundation
  • 2 Voorbereiding
    • 2.1 Wedges
    • 2.2 platen
    • 2.3 Bereiding van bloedagar
  • 3 Gebruik
    • 3.1 Gebruik zonder supplementen
    • 3.2 Als een basisagar voor de bereiding van andere media
  • 4 Kwaliteitscontrole
  • 5 Referenties

stichting

Het is een voedzaam kweekmedium om matig veeleisende micro-organismen te isoleren, in staat om de verrijking ervan te verhogen met de toevoeging van bloed en andere voedingssupplementen.

Het is een niet-selectief kweekmedium, waardoor het de groei van de meeste Gram-positieve en Gram-negatieve bacteriën, evenals enkele schimmels, mogelijk maakt. Het kan echter selectief worden door toevoeging van antibiotica.

Het medium bevat infusie van kalfshersenen en -hart, peptidehydrolysaat uit dierlijke weefsels en caseïne-pancreashydrolysaat; al deze verbindingen werken als bronnen van vitaminen, aminozuren, stikstof en koolstof.

Glucose is een koolhydraat dat micro-organismen energie geeft zodra ze het hebben gefermenteerd. Terwijl natriumchloride en dinatriumfosfaat het osmotische evenwicht handhaven en een pH verschaffen dicht bij neutraliteit. Ten slotte geeft de agar de vaste consistentie aan het medium.

voorbereiding

Weeg 52 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Breng het mengsel naar een warmtebron totdat het kookt, en roer regelmatig tijdens het oplosproces.

U kunt wiggen of platen van BHI agar bereiden zonder toevoegingen.

blokken

Voor het bereiden van de bereiding wiggen dienen om de helft van elke buis, deksel en geautoclaveerd bij 121 ° C gedurende 15 minuten te vullen, ontstaan ​​op een basisbed tot vaste stof. Bewaar vervolgens in de koelkast tot gebruik.

platen

Het opgeloste mengsel wordt gedurende 15 minuten bij 121 ° C geautoclaveerd, laat het afkoelen tot 50 ° C en 20 ml van het medium wordt in steriele petrischalen geserveerd. Ze mogen stollen, omkeren en in de koelkast bewaren tot ze worden gebruikt. Laat de platen op kamertemperatuur komen voor het planten.

De pH van het medium moet 7,4 ± 0,2 zijn.

Het niet-voorbereide medium is beige en is licht amberkleurig.

Bereiding van bloedagar

Na steriliseren van het medium, afkoelen tot een temperatuur van ongeveer 45 tot 50 ° C, voeg het bloed (50 ml), meng en dienen om aseptisch 20 ml homogeniseren in elke petrischaal. Als er bellen worden gevormd op de plaat moet snel worden doorgegeven gasvlam op de bellen op te heffen.

Evenzo kunnen speciale media worden bereid door de overeenkomstige additieven toe te voegen wanneer het mengsel de temperatuur van 45 tot 50 ° C bereikt.

Het medium is kersenrood.

toepassingen

Gebruik zonder supplementen

BHI agar zonder additieven is nuttig als primaire cultuur en voor het planten van zuivere stammen van micro-organismen die gemiddeld of matig veeleisend zijn voor latere identificatie.

Als een middel lichte kleur, is het ideaal voor het bekijken van pigmenten en ook bevat geen storende stoffen kunnen worden uitgevoerd op hem wat biochemische tests zoals oxidase en catalase, of bevestig andere biochemische tests uit kolonies van deze agar-agar.

Evenzo worden BHI-agarwiggen veel gebruikt voor het onderhoud van stammen gedurende een bepaalde tijd in het laboratorium (bacterioteca).

De platen of wiggen die op het oppervlak zijn geplant met bacteriële stammen worden gedurende 24 tot 48 uur bij 37 ° C geïncubeerd. Terwijl, in schimmels, de temperatuur en de incubatietijd afhangen van het type schimmel dat wordt gezocht.

Als een basisagar voor de bereiding van andere media

Met deze basis kunnen verrijkte en selectieve media worden bereid.

verrijkt

De belangrijkste functie ervan is om als basis te dienen bij de bereiding van bloedagar voor routinegebruik in microbiologische laboratoria. Vooral de BHI-base is bevorderlijk voor de isolatie van stammen van Streptococcus sp. Het heeft echter het nadeel dat het niet geschikt is voor het waarnemen van hemolysepatronen omdat het glucose bevat.

Het wordt ook gebruikt bij de bereiding van konijnen- of paardenbloedagar voor de isolatie van Haemophilus sp. Voor betere resultaten kun je een verrijkingssupplement toevoegen (IsoVitaleX).

Als de monsters van de luchtwegen naar de agar komen, kan bacitracine worden toegevoegd om de bijbehorende flora te remmen en de kans op herstel van de stammen van Haemophilus sp.

Aan de andere kant kan bloedagar (lam of mens) worden bereid met tellurietcystine om te isoleren Corynebacterium diphtheriae. Evenzo is het nuttig om konijnenbloedagar te bereiden, met de toevoeging van cystine en glucose voor de isolatie van Francisella tularensis.

Zaden van bloedagarplaten worden gedaan door uitputting en geïncubeerd bij 35-37 ° C gedurende 24-48 uur in micro-aerofiele (5-10% CO)2).

selectief

Dit medium met de toevoeging van antibiotica kan Sabouraud-agar vervangen voor de isolatie van schimmels.

De combinatie van BHI-agar met chlooramfenicol - gentamicine of penicilline -, streptomycine en paardenbloed is ideaal voor het isoleren van Histoplasma capsulatum.

Afhankelijk van het te isoleren micro-organisme wordt incubatie bij 35-37 ° C of bij kamertemperatuur in aerobio's aanbevolen. Soms is incubatie in beide temperatuurbereiken noodzakelijk, hiervoor worden 2 platen gebruikt.

Sommige schimmels houden van Trichophyton mentagrophytes ze moeten gedurende maximaal 7 dagen bij kamertemperatuur worden geïncubeerd.

Kwaliteitscontrole

Van elke bereide partij wordt aanbevolen om 24 uur lang een plaat of wig bij 37 ° C te incuberen en te controleren of er geen groei is; Vooral belangrijk bij het bereiden van bloedagar omdat het een gemakkelijk vervuild medium is.

Anderzijds kan de kwaliteit van het medium worden geëvalueerd door bekende of gecertificeerde standaardstammen in te enten en hun ontwikkeling te observeren.

In deze zin, om de BHI agar te evalueren zonder additieven, stammen van Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 of Candida albicans ATCC 10231. Ze worden gedurende 24 tot 48 uur bij 37 ° C in aerobio's geïncubeerd. In alle gevallen wordt een bevredigende groei verwacht.

Om de bloedagarplaten te evalueren, stammen van  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 of Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bacteriële stammen worden 24 uur bij 37 ° C in microaerophilicus geïncubeerd, terwijl de schimmel tot 7 dagen bij kamertemperatuur in een vochtige kamer wordt geïncubeerd. In alle gevallen wordt een bevredigende groei verwacht.

referenties

  1. Laboratoria Britania. Hersenenhartinfusie Agar. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com.
  2. BD Laboratories Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Beschikbaar op: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Brain Heart Infusion Agar. 2009.
  4. Neogen-laboratorium. Brain Heart Infusion Agar. Beschikbaar bij: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Agar blood: foundation, gebruik en voorbereiding. 2018. Beschikbaar op: lifeder.com.
  6. Bijdragers van Wikipedia. Hersenen hartinfusie Wikipedia, de gratis encyclopedie. 19 september 2018, 03:58 UTC. Beschikbaar op: wikipedia.org. Betreden op 2 maart 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.