Delen:
Cetrimida agar foundation, voorbereiding, toepassingen
de cetrimide-agar of cetrimide is een selectief vast kweekmedium, ontworpen voor de isolatie van Pseudomonas aeruginosa. Het is gebaseerd op het benadrukken van de productie van pigmenten die kenmerkend zijn voor deze soort en is ontwikkeld op basis van de aanpassing van Tech agar, gemaakt door King, Ward en Raney.
De oorspronkelijke formule bevatte magnesiumchloridezouten, kaliumsulfaat, digestie van alvleeskliergelatine en agar-agar. De modificatie van de formule bestond uit de toevoeging van cetrimide (cetyltrimethylammoniumbromide) en glycerol.
Cetrimide-agar is nuttig voor de microbiologische studie van monsters waarbij de aanwezigheid van Pseudomonas aeruginosa. Opgemerkt moet worden dat deze bacterie van groot belang is, omdat het, hoewel het deel uitmaakt van de normale omgevingsmicrobiota, zich vaak gedraagt als een opportunistische pathogeen..
Daarom zijn een van de meest voorkomende problemen veroorzaakt door deze kiem nosocomiale infecties, dat wil zeggen, die zich voordoen in de ziekenhuisomgeving, waarbij patiënten worden aangevallen met een depressief immuunsysteem..
Anderzijds, vanwege de affiniteit die dit micro-organisme heeft met vocht, zijn de meest kwetsbare besmettingsdoelen: beademingsapparatuur, geneesmiddelen, vernevelaars, waterbronnen, airconditioners, ontsmettingsmiddelen, zeepoplossingen, injecteerbare oplossingen, open wonden katheters, urinekatheters, onder anderen.
In deze zin is cetrimide-agar nuttig voor het uitvoeren van microbiologische controles en gewassen op de eerder genoemde elementen.
index
- 1 Foundation
- 1.1 Interpretatie
- 2 Voorbereiding
- 3 Gebruik
- 4 gezaaid
- 5 Beperkingen
- 6 Kwaliteitscontrole
- 7 Referenties
stichting
Cetrimide-agar is gebaseerd op het vermogen van het medium om de groei van te bevorderen P. aeruginosa, stimuleren de productie van hun pigmenten en remmen op hun beurt de groei van andere micro-organismen.
Deze eigenschappen zijn te wijten aan de functie die elk van zijn componenten vervult. Het aanwezige gelatine-pepton dient als een bron van stikstof, vitaminen en mineralen. Glycerol of glycerine werkt als een koolstofbron.
Cetrimide (cetyltrimethylammoniumbromide) is van zijn kant de stof die de groei van andere bacteriën remt dan P. aeruginosa, inclusief andere soorten die tot hetzelfde geslacht behoren.
Remming treedt op omdat cetramide werkt als een kationisch detergens, waardoor de plasmamembraan van de meeste bacteriën wordt gedestabiliseerd, met uitzondering van P. aeruginosa en enkele anderen die erin slagen te overleven.
Aan de andere kant bevat het magnesiumchloride en kaliumsulfaat. Deze verbindingen stimuleren fenotypische expressie gerelateerd aan het vermogen van Pseudomonas aeruginosa van het produceren van verschillende pigmenten, waaronder pyocyanine, pioverdin, piorubin, piomelanin en fluoresceïne. Ten slotte bevat het agar-agar, wat het een solide consistentie geeft.
interpretatie
De interpretatie van de groei verkregen in deze agar wordt op de volgende manier gemaakt:
De waarneming van ronde, gladde kolonies met regelmatige randen, die blauwgroene, groene, bruine of roodachtige pigmenten produceren, plus de emissie van fruitige geur (aminoacetophenon), is een vermoedelijk resultaat van de aanwezigheid van deze bacterie in het monster..
Aan de andere kant is het een indicatie P. aeruginosa de waarneming van een helder geelachtig groen pigment op de koloniën wanneer de plaat wordt blootgesteld aan ultraviolet licht.
Opgemerkt moet worden dat elke waargenomen kleur te wijten is aan de productie van een specifiek pigment. Het blauwgroene pigment komt overeen met de productie van pyocyanine, de groene tot pioverdin, de roodachtige tot piorrubine, de bruine tot piomelanine en de fel geelachtig groene fluorescentie onder ultraviolet licht tot fluoresceïne.
voorbereiding
Weeg 43 g van het gedehydrateerde medium af en los op in gedestilleerd water. Voeg 10 ml glycerol toe. Breng het mengsel naar een warmtebron. Laat het een paar minuten koken tot het volledig is opgelost.
Autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Laten staan en serveren in steriele petrischalen wanneer de temperatuur rond de 50 ° C is.
Laat stollen, omkeren, bestellen in plakken en bewaar in een koelkast tot gebruik. Om cetrimide-agarplaten te planten, moeten ze van tevoren uit de koelkast worden verwijderd en mogen ze op kamertemperatuur komen..
De uiteindelijke pH van het medium moet 7,2 ± 0,2 zijn.
De kleur van het gedehydrateerde medium is beige en de bereiding is ondoorzichtig wit.
toepassingen
Cetrimide-agar kan worden gebruikt om alle soorten monsters te planten waarin de aanwezigheid van Pseudomonas aeruginosa. Daarom is het nuttig op alle gebieden van de microbiologie (milieu, industrie, kliniek, water en voedsel).
Het is van groot belang om ziekenhuisomgevingen te analyseren en zo corrigerende mediations toe te passen, omdat dit micro-organisme patiënten bereikt via apparatuur, medicijnen, oplossingen en besmette benodigdheden die door de patiënt worden gebruikt.
Op deze manier kan het micro-organisme de onderste luchtwegen, urinewegen en wonden van patiënten met immunosuppressie infecteren.
Kolonieaantallen kunnen ook worden gemaakt P. aeruginosa in microbiële limiettests.
geplant
Cetrimide-agar kan als een primaire cultuur worden gebruikt. De plaat wordt geïnoculeerd in een van zijn randen en van daaruit wordt hij verdeeld door uitputting naar de rest van de plaat. Vloeibare monsters kunnen op het oppervlak worden gezaaid met een drigalski-spatel.
De platen worden geïncubeerd in aerobiose bij 37 ° C gedurende 24 uur incubatie.
beperkingen
-Een klein percentage van stammen van Pseudomonas aeruginosa geen pyocyanine produceren, dus u kunt een vals-negatief interpreteren.
-Sommige soorten Pseudomonas van klinisch belang zijn geremd in dit medium.
-Ondanks het observeren van de kenmerken die zijn beschreven voor Pseudomonas aeruginosa, ze moeten worden bevestigd met aanvullende identificatietests. Een test die niet mag ontbreken, is de oxidase-test, deze zou positief moeten zijn.
-Sommige enterobacteriën kunnen in dit medium groeien en een geel pigment ontwikkelen, maar dit verschilt van Pseudomonas aeruginosa waarbij bij het onderwerpen van de plaat aan ultraviolet licht er geen fluorescentie is.
-Serratia marcescens slaagt erin een roze pigment te ontwikkelen en te produceren.
-Als de plaques geënt met cetrimide-agar gedurende een tijd bij kamertemperatuur worden blootgesteld, zijn de stammen van P. aeruginosa ze kunnen de fluorescentie verliezen die wordt waargenomen onder ultraviolet licht, maar de eigenschap wordt hersteld als het opnieuw wordt geïncubeerd bij 37 ° C.
Kwaliteitscontrole
Om de goede werking van cetrimide-agar te testen, kunnen controlestammen worden gebruikt, zoals: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 en Staphylococcus aureus ATCC 25923.
De verwachte resultaten zijn:
- naar P. aeruginosa goede groei, met blauwgroen pigment en positieve fluoresceïne.
- S. maltophilia en S. aureus zal gedeeltelijk of volledig worden geremd.
- Dat wordt verwacht Escherichia coli volledig worden geremd.
referenties
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotypische en serologische karakterisering van klinische isolaten van Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Laboratoria Conda Pronadisa. Cetrimide-agarbasis. 2014. Beschikbaar op: condalab.com
- Laboratoria Britania. Cetrimida-agar. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
- BD Laboratories BD Pseudosel-agar (Cetrimide-agar). 2013. Beschikbaar op: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratory, C.A. Cetrimide-agar. 2009. Beschikbaar op: http://f-soria.es