Delen:
Agar chocolade foundation, gebruik en bereiding
de chocolade-agar het is een vast, verrijkt, niet-selectief en niet-differentieel kweekmedium. Het wordt hoofdzakelijk gebruikt voor de isolatie van micro-organismen die vanuit het oogpunt van voeding vragen, hoewel het elk type bacterie kan groeien.
Dat is de reden waarom de bruikbaarheid ervan vooral toeneemt bij het zaaien van monsters die normaal steriel zijn, zoals CSF en gewrichtsvloeistof. Hoewel het ook is opgenomen in de middelen die zijn gekozen voor het zaaien van polymicrobiële monsters, maar in deze gevallen is het noodzakelijk om antibiotica toe te voegen die de bijbehorende flora remmen.
Dit medium heeft een karakteristieke bruine kleur die erg lijkt op chocolade, vandaar de naam. Het preparaat lijkt erg op bloedagar, alleen in dit geval moet het bloed worden verwarmd om de rode bloedcellen te laten breken.
De bereiding ervan, zoals bloedagar, is zeer delicaat, omdat het gemakkelijk wordt verontreinigd. Om deze reden verkiezen veel laboratoria dit medium dat al is voorbereid door commerciële bedrijven die hun kwaliteit waarborgen, te verwerven.
index
- 1 Foundation
- 2 Gebruik
- 2,1 Chocolade-agar bereid met Columbia-agar
- 2.2 Chocolade-agar bereid met GC-basisagar (voor gonokokken)
- 2.3 Chocolade-agar bereid met Müeller Hinton-agar
- 2.4 Chocolade-agar bereid met Thayer Martin-agar
- 3 Voorbereiding
- 3.1 Berekeningen
- 3.2 Weeg en los op
- 3.3 Steriliseren
- 3.4 Aggregatie van bloed
- 3.5 Een andere manier om chocolade-agar te bereiden zonder bloed te gebruiken
- 4 Kwaliteitscontrole
- 5 Referenties
stichting
Dit medium bestaat uit een basis van agar die rijk is aan voedingsstoffen en verwarmd bloed. De hemolyse van rode bloedcellen levert de factor X (hemin) en factor V (NAD), die nodig zijn voor de groei van sommige micro-organismen, zoals het geslacht. Haemophilus. Het is ook erg handig voor de isolatie van Neisserias sp.
Net als bloedagar kunnen verschillende media worden gebruikt als basisagar afhankelijk van de behoefte. Onder de gebruikte media zijn infusie van hersenhart en trypticase-soja-agar, hoewel de meest aanbevolen zijn Columbia-agar, Müeller Hinton, GC-agar en Thayer Martin-agar..
Sommige varianten van chocolade-agar omvatten een in de handel verkrijgbaar verrijkt supplement genaamd Isovitalex of Polivitex.
Deze supplementen bevatten vitamine B12, L-glutamine, adenine, guanine hydrochloride, p-aminobenzoëzuur, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD), thiaminepyrofosfaat, ijzernitraat, thiamine hydrochloride, cysteine hydrochloride, L-cystine en glucose.
Het is belangrijk op te merken dat chocolade-agar meer is verrijkt dan bloedagar, maar de waarneming van hemolysepatronen niet toelaat.
toepassingen
Chocolade-agar bereid met Columbia-agar
Dit medium bevat met caseïne en hart, alvleesklier verteerd, verteerd vleespeptide, natriumchloride, agar, gistextract en maïszetmeel. Het is ook rijk aan vitaminen, mineralen en essentiële aminozuren.
Deze basis met verwarmd bloed is ideaal voor de isolatie van bacteriën van het geslacht Neisseria. Aan de andere kant, als een supplement voor Brucella aan het medium wordt toegevoegd, kan het bovengenoemde micro-organisme worden geïsoleerd. De resultaten worden verbeterd met paardenbloed.
Chocolade-agar bereid met GC-basisagar (voor gonokokken)
Dit medium bevat peptonen, maïszetmeel, monobasische en dibasische buffers, natriumchloride en agar.
De meeste chocolade agar presentaties worden commercieel bereid met deze basis en bevatten verwarmd bloed, maar een synthetisch mengsel van hemine en een chemische supplement van groeifactoren, vitaminen, mineralen, aminozuren, glucose en factor V.
Chocolade-agar bereid met Müeller Hinton-agar
Het wordt gebruikt om de antimicrobiële gevoeligheidstest van veeleisende micro-organismen uit te voeren, zoals Streptococcus pneumoniae gebruik van 5% verwarmd rambloed.
Het dient ook voor de primaire isolatie van Neisserias en Haemophilus, maar in het specifieke geval van de isolatie van Haemophilus het gebruik van paardenbloed heeft de voorkeur, omdat het een rijke bron van factor X en V is.
Aan de andere kant, als het te zaaien monster afkomstig is uit een niet-steriel gebied, wordt de toevoeging van antibiotica aanbevolen om de normale flora van het gebied te remmen..
Voorbeeld voor respiratoire monsters waarbij de aanwezigheid van bacteriën van het geslacht wordt vermoed Haemophilus Bacitracine wordt gebruikt om de groei van te remmen Stafylokokken, Micrococcus, Streptococcus en Saprophytic Neisseria.
In het geval van monsters van genitale chancre, waar het wordt vermoed Haemophilus ducreyi, Een op de volgende manier bereide chocolade-agar is met succes gebruikt: Müeller-Hinton-agar met 5% geprocolatiseerd paardenbloed, 1% Isovitalex-verrijking en 3 μg / ml vancomycine.
Chocolade-agar bereid met Thayer Martin-agar
Dit medium is speciaal voor de isolatie van Neisseria gonorrhoeae. Het moet antibiotica bevatten om de bijbehorende flora te remmen. Lambloed wordt gebruikt.
voorbereiding
De indicaties voor de bereiding van de te gebruiken basisagar moeten worden bekeken. Ze zitten op de achterkant van het pakket met gedehydrateerd medium. Ze beschrijven meestal hoeveel er moet worden gewogen om een liter kweekmedium te bereiden.
In het laboratorium kun je exact de benodigde hoeveelheid voorbereiden, het kan meer of minder dan één liter zijn.
berekeningen
Een regel van drie wordt gemaakt om te berekenen hoeveel moet worden gewogen om het gewenste volume voor te bereiden. bijvoorbeeld:
Als het voor 1 liter 40 g moet wegen en het laboratorium 800 ml nodig heeft, wordt gezegd:
1000 ml -40 gr
800 ml - X
De formule is als volgt:
X = 32 gr (hoeveelheid te wegen voor 800 ml).
Weeg en los op
We gaan door met het wegen van de benodigde hoeveelheid en plaatsen het in een fiola met water.
Verwarm tot een middelhoog vuur en meng voorzichtig met draaiende bewegingen totdat het gedehydrateerde medium volledig is opgelost, laat het gedurende 1 minuut koken.
steriliseren
De fiola wordt in de autoclaaf geïntroduceerd om het medium gedurende 20 minuten bij 121 ° C te steriliseren.
Aggregaat van bloed
Bij het verlaten van de autoclaaf blijft hij rusten totdat de temperatuur van het medium ongeveer tussen 56 en 70 ° C is om het bloed te plaatsen en te mengen totdat het medium bruin wordt.
Als je supplementen gaat toevoegen, is dit het moment om het te doen. Meng en serveer vervolgens 20 ml aan elke steriele petrischaal.
De gehele procedure moet worden uitgevoerd in een laminaire stromingkap of rond de bunsenbrander.
Laten staan tot ze stollen en omgekeerd blijven in de koelkast.
Een andere manier om chocolade-agar te bereiden zonder bloed te gebruiken
Het basismedium wordt bereid zoals hierboven beschreven, het in de handel verkrijgbare gedehydrateerde hemoglobine wordt opgelost en gesteriliseerd in de autoclaaf.
Beide oplossingen mogen afkoelen tot 50 ° C, verbinden en het supplement toevoegen. Meng aseptische omstandigheden en serveer dan in steriele petrischalen.
Kwaliteitscontrole
Het is belangrijk dat het bloed op de aangegeven temperatuur wordt geplaatst, omdat het ideaal is om de rode bloedcellen te lyseren en tegelijkertijd de factor V te behouden die thermogevoelig is.
Er mogen geen luchtbellen op het oppervlak van de agar zitten. Elke batch van 100 platen moet gedurende 24 uur bij 37 ° C een of twee platen in de kachel worden geïncubeerd om de steriliteit ervan te controleren.
Voor het beste resultaat moet chocolade-agar kort na de bereiding worden gebruikt.
Controle bacteriestammen moeten in het laboratorium worden genomen om de werkzaamheid van het vers bereide medium voor de groei van de belangrijkste veeleisende micro-organismen van klinisch belang te beoordelen.
referenties
- García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktische klinische microbiologie. University of Cadiz, 2e editie. UCA-publicatieservice.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Argentinië. Panamericana S.A Editorial.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5de ed.). Argentinië, redactie Panamericana S.A..
- Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Haalbaarheid van het gebruik van het basiscultuurmedium van GC-Biocen Agar in het Microbiology Laboratory. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Beschikbaar bij: scielo.sld.
- Bijdragers van Wikipedia. Chocolade-agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 17 december 2018, 19:54 UTC. Beschikbaar op: en.wikipedia.org.