Simmons citraat-agar foundation, voorbereiding en gebruik

de Simmons Citraat-agar Het is een vast medium dat wordt gebruikt als een biochemische test om micro-organismen te identificeren, met name Gram-negatieve bacillen. Het originele medium is in 1923 door Koser gemaakt.

Het citraatmedium van Koser bestond uit een bouillon met natriumfosfaat, ammoniumfosfaat, monokaliumfosfaat, magnesiumsulfaat en natriumcitraat..

Zoals te zien is, de enige koolstofbron van het medium citraat en stikstof ammoniumfosfaat, weglaten eiwitten en koolhydraten voor deze elementen, gewoonlijk aanwezig in andere media.

Daarom kan de bacterie geïnoculeerd in dat medium alleen reproduceren als het in staat is om de citraatkoolstof te nemen. De test was positief als er een troebelheid in het medium was, maar het had het nadeel dat niet-specifieke troebelheid kon optreden.

Dit probleem werd opgelost door Simmons agar en broomthymolblauw toe te voegen aan Kosers oorspronkelijke formule. Hoewel het principe hetzelfde is, wordt het anders geïnterpreteerd.

index

• 1 Foundation
  • 1.1 Zaaimodus
  • 1.2 Interpretatie
• 2 Voorbereiding
• 3 Gebruik
• 4 Laatste overwegingen
  • 4.1 Inoculum
  • 4.2 Gezaaid
  • 4.3 Kleurintensiteit
• 5 Referenties

stichting

Sommige bacteriën hebben het vermogen om te overleven in afwezigheid van fermentatie of productie van melkzuur, waardoor ze energie nodig hebben door het gebruik van andere substraten. In deze test is de enige bron van koolstof die wordt aangeboden citraat.

Bacteriën die onder deze omstandigheden kunnen overleven, metaboliseren citraat snel door een alternatief voor de traditionele route, met behulp van de tricarbonzuurcyclus of de citraatfermentatiecyclus.

Citraat katabolisme door de bacterie omvat een enzymatisch mechanisme zonder tussenkomst van co-enzym A. Dit enzym is bekend dat citricasa (oxaalacetaat-citraat lyase) of desmolase citraat. De reactie vereist de aanwezigheid van een tweewaardig kation, dat in dit geval wordt geleverd door het magnesium.

De reactie genereert oxaalacetaat en pyruvaat, die dan aanleiding geven tot organische zuren in het midden van een alkalische pH gevormd door het gebruik van de stikstofbron. Deze organische zuren worden gebruikt als een koolstofbron die carbonaten en bicarbonaten genereert, waardoor het medium verder alkalisch wordt gemaakt.

Zaaien modus

Simmons citraatmedium moet licht worden geïnoculeerd in vissenstaarten met behulp van een rechte lus of naald en gedurende 24 uur bij 35-37 ° C worden geïncubeerd. Aan het einde van de tijd worden de resultaten waargenomen.

Het zaaien gebeurt alleen op het oppervlak van de agar. Geen lekke banden.

interpretatie

Als het medium de oorspronkelijke kleur heeft (groen) en er geen zichtbare groei is, is de test negatief, maar als het medium blauw wordt, geeft dit de aanwezigheid van alkalische producten aan, die wordt gedetecteerd door de pH-indicator. In dit geval is de test positief.

Dit gebeurt omdat als de bacterie de koolstof van het citraat gebruikt, het ook in staat is om de stikstof van het ammoniumfosfaat te nemen waarmee het ammoniak afgeeft, waardoor het medium alkaliseert.

Anderzijds, als de groei van bacteriën in het medium werd waargenomen, maar geen kleurverandering, ook moet de test positief beschouwd, omdat als er groei betekent dat de bacterie in staat om citraat te gebruiken als een koolstofbron, hoewel er op dit moment geen pH-verandering is (soms kan dit duren).

Als er twijfel bestaat in de interpretatie van de uiteindelijke kleur, kan deze worden vergeleken met een buis van niet-geënte citraat.

voorbereiding

Weeg 24,2 gram van het gedehydrateerde medium af voor een liter water. Mix en laat ongeveer 5 minuten staan. Voltooi het oplossen van het medium door 1 of 2 minuten te verwarmen, en roer regelmatig.

Dien 4 ml in reageerbuizen en autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Bij het verlaten van de autoclaaf, kantel met behulp van een steun op een zodanige manier dat de agar stolt in de vorm van een fluitpiek met weinig klier of bodem en meer afgeschuind.

De uiteindelijke pH van het citraatmedium is 6,9 (groen). Dit medium is erg gevoelig voor pH-verandering.

Bij pH 6 of lager wordt het medium geel. Deze kleur wordt niet waargenomen in de test met bacteriën.

En bij pH 7,6 of hoger, verandert het medium in intens Pruisisch blauw.

gebruik

Simmons-citraat-agar wordt gebruikt voor de identificatie van bepaalde micro-organismen, met name bacillen die behoren tot de familie Enterobacteriaceae en andere glucose-niet-fermenterende bacillen..

Laatste overwegingen

Simmons citraatmedium is een zeer delicate test, omdat valse positieven kunnen worden verkregen als bepaalde fouten worden gemaakt.

De zorg die moet worden genomen, is de volgende:

inoculum

Heeft een zeer dikke of geladen bacteriële entstof niet maken, omdat het een koperachtige gele kan veroorzaken in plaats van zaad ontwikkelt, zonder dat de rest van de helft, maar denk wel dat er groei. Hetzelfde betekent niet positiviteit van de test.

Ook kan een dikke inoculum vals positieve genereren, omdat de voorgevormde organische verbindingen binnen de celwanden van bacteriën sterft voldoende koolstof en stikstof kan vrijmaken om de pH indicator uitgaat.

Daarom is het ideaal om met de naald te planten in plaats van de platina-hendel, om te voorkomen dat er overtollig materiaal wordt opgenomen.

geplant

Anderzijds, wanneer de batterij wordt geplant voor biochemische identificatie van het betrokken organisme proeven, is het belangrijk dat de test citraat als eerste te inoculeren om meevoeren van eiwitten of koolhydraten anderszins voorkomen.

Onder deze omstandigheden is het mogelijk om een ​​vals-positief resultaat te verkrijgen, omdat elk van deze stoffen die per abuis worden ingebracht, zal worden gemetaboliseerd en een pH-verandering zal veroorzaken.

Een andere manier om het slepen van stoffen te voorkomen, is de hendel goed te verbranden en nieuwe inoculum te nemen tussen de ene test en de andere.

Voorzichtigheid is ook geboden bij het aanraken van de kolonie om het inoculum uit te voeren, omdat het moet worden vermeden om een ​​deel van de agar uit de cultuur waaruit de bacteriën komen te slepen, als gevolg van de eerder toegelichte.

In deze zin raden Matsen, Sherris en Branson aan het inoculum in fysiologische oplossing te verdunnen voordat de citraattest wordt geïnoculeerd om de overdracht van andere koolstofbronnen te voorkomen.

Kleurintensiteit

Er moet rekening worden gehouden met het feit dat de intensiteit van de kleur die wordt geproduceerd wanneer de test positief is, kan variëren afhankelijk van het bedrijfshuis.

Bovendien zijn er micro-organismen die na 24 uur positief testen, maar er zijn andere stammen die 48 uur of langer nodig hebben om een ​​pH-verandering te veroorzaken..

referenties

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemische tests voor de identificatie van bacteriën van klinisch belang. 3e druk Redactioneel Panamericana. Buenos Aires Argentinië.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
4. BD Laboratories BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Beschikbaar op: bd.com
5. Laboratoria Britania. Simmons Citraat Agar. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmons Citraat Agar. 2016. Beschikbaar op: andinamedica.com.