Agar CLED foundation, gebruik en voorbereiding

de CLED-agar (Cystine-Lactose-Electrolyten-Deficient) is een differentieel vast kweekmedium, gebruikt voor de diagnose van urineweginfecties. De samenstelling van het kweekmedium is ontworpen voor de goede groei van urinaire pathogenen en is ideaal voor het kwantificeren van kolonievormende eenheden (CFU).

Het CLED-kweekmedium is niet-selectief, omdat Gram-negatieve en ook Gram-positieve micro-organismen erin kunnen groeien. Maar dit is geen probleem, omdat de meeste urineweginfecties worden veroorzaakt door een enkel type micro-organisme.

In het geval van polymicrobiële infecties kunnen 2 of 3 verschillende bacteriën worden verkregen, maar het is zeer zeldzaam en meestal zijn het besmette monsters.

Onder de Gram-negatieve bacteriën die in dit medium kunnen groeien, bevinden zich de bacillen die tot de familie behoren Enterobacteriaceae en andere enterische bacillen, waarbij de uropathogenen het vaakst in urinemonsters worden geïsoleerd, het volgende: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, onder andere.

Evenzo behoren onder de Gram-positieve bacteriën die kunnen groeien in dit medium Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp en ze kunnen zelfs gist laten groeien, net als het complex Candida albicans.

Vanwege de chemische samenstelling van het medium staat het echter de groei van enkele veeleisende genitourinaire pathogenen, zoals Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, onder andere.

index

• 1 Oprichting van de CLED-agar
• 2 Oprichting van de CLED-agar (Bevis)
• 3 Gebruik
  • 3.1 Urinemonsters zaaien
  • 3.2 Interpretatie
  • 3.3 Identificatie
• 4 Voorbereiding
• 5 Referenties

Oprichting van de CLED-agar

Het CLED kweekmedium heeft als een energiebron vleesextract, caseïne pancreashydrolysaat en gelatine hydrolysaat. Ze bieden de voedingsstoffen voor de ontwikkeling van niet veeleisende bacteriën.

Het bevat ook cystine, een aminozuur dat de groei van coliformen mogelijk maakt, te onderscheiden door zijn kleine omvang.

Evenzo bevat lactose fermenteerbare koolhydraten, daarom is dit medium differentieel; in staat zijn de fermenterende bacteriën te onderscheiden van de niet-fermenterende lactose.

Fermenteren bacteriën draai maken van de pH van de zuurproductie voor het ontwikkelen van gele kolonies, terwijl de niet-fermentatieve bacteriën geen veranderingen in de omgeving te genereren, waardoor het nemen van de kleur van het origineel agar, groen.

De fermentatiereactie wordt onthuld dankzij de aanwezigheid van de pH-indicator, die in dit medium broomthymolblauw is.

Aan de andere kant remt de lage elektrolytconcentratie van het medium de typische invasieve groei van het geslacht Proteus, genoemd zwermen effect. Dit genereert een voordeel ten opzichte van andere middelen, omdat het het tellen van de UFC's mogelijk maakt, inclusief als het geslacht Proteus aanwezig is.

De lage concentratie van elektrolyten remt echter de groei van sommige soorten van het geslacht Shigella, Dit is een nadeel met betrekking tot andere middelen.

Basis van CLED-agar (Bevis)

Er is een variant of modificatie van dit medium gemaakt door Bevis, die de originele fuchsinezuursamenstelling (Andrade-indicator) in de oorspronkelijke samenstelling verwerkte. Het werkt samen met broomthymolblauw om gisting te onderscheiden van niet-fermenterende bacteriën.

Het verschil tussen het conventionele en het gemodificeerde medium is de kleur die de koloniën aannemen. In het geval van lactose fermenteren bacteriën kolonies ontwikkelen van een roodachtig oranje met een roze of rood halo, terwijl nonfermenters zijn blauwgrijs.

toepassingen

CLED-agar wordt uitsluitend gebruikt voor het inzaaien van urinemonsters. Het gebruik van dit medium komt vooral veel voor in Europese laboratoria, terwijl het in Amerika minder wordt gebruikt.

De verzameling van het monster moet aan bepaalde parameters voldoen om betrouwbare resultaten te verkrijgen, waaronder:

• Geen antibiotica nemen voor het nemen van het monster.
• Neem de urine bij voorkeur vanaf het eerste uur van de ochtend, omdat het meer geconcentreerd is, wanneer het niet mogelijk is om monsters te nemen met invasieve methoden.
• Was de geslachtsdelen grondig voordat u het monster neemt.
• Gooi de eerste urinestroom weg en plaats de container.
• Verzamel tussen 25 en 30 ml urine in steriel geëtiketteerde containers.
• Ga direct naar het laboratorium in het ijs.
• Het moet worden verwerkt vóór 2 uur emissie of gekoeld bij 4 ° C gedurende maximaal 24 uur.

Urinemonsters zaaien

Het urinemonster moet 1:50 worden verdund.

Breng voor verdunning 0,5 ml urine van de patiënt aan en verdun met 24,5 ml steriele fysiologische oplossing.

Meet 0,1 ml van de verdunde urine en zaai per oppervlak met een drigalski-spatel op het CLED-medium. Dit is de seeding-methode die is aangegeven voor het tellen van kolonies. Dat is de reden waarom het wordt gebruikt in urinemonsters, omdat de resultaten moeten worden uitgedrukt in CFU / ml.

Voor kwantificering van deze kolonies, als volgt: tellen kolonies en vermenigvuldig met de plaat 10 en 50. Deze verkrijgt het aantal CFU / ml urine.

interpretatie

Tellen boven 100.000 CFU / ml -Indica urinaire infectie

Tellen onder 1000 CFU / ml- Geen infectie

Tellen tussen 1000 - 10.000 CFU / ml - Ongetwijfeld mogelijke contaminatie, herhaal het nemen van monsters.

identificatie

De kolonies gekweekt op CLED-agar zouden een Gram moeten worden gemaakt en afhankelijk van de morfotypische eigenschappen van het micro-organisme wordt een bepaalde subcultuur uitgevoerd.

Als het bijvoorbeeld een Gram-negatieve bacillus is, wordt deze op een MacConkey-agar gezaaid, waar de fermentatie of niet van de lactose wordt bevestigd. Bovendien wordt een voedzame agar bevestigd om de oxidase-test uit te voeren.

In het geval dat het Gram Gram-positieve cocci onthult, kan het worden gesubkweekt in zoute mannitol-agar en in voedingsagar. In het laatste geval wordt de catalase-test uitgevoerd. Tenslotte, als gisten worden waargenomen, zal het op een Sabouraud-agar worden gezaaid.

Veel laboratoria vermijden het gebruik van het CLED-medium en geven er de voorkeur aan om alleen bloedagar, MacConkey en voedingsagar te gebruiken voor het inzaaien van de urinemonsters.

voorbereiding

In een flacon met 1 liter gedestilleerd water, los 36,2 g gepoederde CLED-agar op. Na 5 minuten rust verwarmt u de geresuspendeerde agar en mengt u constant tot het gedurende 1 minuut is gekookt.

Steriliseer vervolgens gedurende 15 minuten bij 121 ° C in de autoclaaf. Als de tijd voorbij is, wordt deze uit de autoclaaf verwijderd en afgekoeld tot een temperatuur van 45 ° C is bereikt. Vervolgens gediend tussen 15 - 20 ml in elke steriele petrischaal.

De procedure voor het serveren van de platen moet worden uitgevoerd in een laminaire stroming of voor de bunsenbrander om besmetting te voorkomen.

Verwarmde platen laten stollen, worden in een omgekeerde schaalhouder geplaatst en in een koelkast bewaard (2-8 ° C) tot gebruik.

De uiteindelijke pH van het bereide medium moet 7,3 ± 0,2 zijn.

referenties

1. Aanbevelingen voor de microbiologische diagnose van urineweginfectie. chil. infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Beschikbaar op: scielo.org.
2. Panchi J. Identificatie van het microbiële middel dat urineweginfecties veroorzaakt bij interne patiënten die blaaskatheterisatie ondergaan. 2016. Niet-gegradueerde werken om de titel Licentiate in Clinical Laboratory aan te vragen. Technische universiteit van Ambato. Ecuador.
3. Laboratoria Britania. Halve CLED. Beschikbaar op: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories Gebruiksaanwijzing, CLED Agar. 2013 Beschikbaar op: www.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories Basishandleiding van Microbiology. Beschikbaar bij: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodriguez-Creixems M, Diaz MD, Vicente T, Bouza E. De CLED agar optie in urine cultuur routine. Een prospectieve en vergelijkende evaluatie. Diagnostische Microbiol-infectie Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktische klinische microbiologie. University of Cadiz, 2e editie. UCA-publicatieservice.