Agar heeft een standaardstichting, -voorbereiding en -gebruik



de standaard accountagar Het is een vast medium, niet-selectieve, ontworpen voor het kwantificeren van de aanwezige microbiële belading in watermonsters aerobic consumptie, afvalwater, melkdranken en andere voedingsmiddelen. Dit medium staat ook bekend als PCA-agar, voor zijn afkorting in het Engelse Plate Count Agar. Het werd in 1953 gemaakt door Buchbinder, Baris en Goldstein.

De standaardagar-mediumrekening bestaat uit gistextract, tripteïne, glucose, agar en gedistilleerd water. Deze formulering bevat elementaire voedingselementen die de ontwikkeling van de huidige aerobe microbiële lading mogelijk maken, niet veeleisend.

Omdat het medium geen remmers bevat, kunnen de bacteriën zich zonder enige beperking ontwikkelen, dus het is ideaal voor de algemene kolonietelling. De plaatkwantificatietechniek zal echter niet alle aanwezige bacteriën detecteren, maar alleen die welke in staat zijn te groeien onder de omgevingscondities waaraan de standaard gezaaid agar wordt onderworpen..

Hier, de kwantisering techniek plaat tracht het algemeen bepalen de hoeveelheid bacteriën mesofiele aërobe soort, dwz uitgevoerd bij temperaturen tussen 25 en 40 ° C, met een optimale groeitemperatuur bij 37 ° C.

Deze bacteriegroep is erg belangrijk, omdat de meeste van de pathogene bacteriën voor de mens zijn.

Opgemerkt moet worden dat het soms interessant kan zijn om de hoeveelheid psychrofiele bacteriën in voedsel te kwantificeren. Deze bacteriën zijn bacteriën die zich ontwikkelen bij lage temperaturen (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Evenzo kunnen thermofiele bacteriën, die zich ontwikkelen in een bereik tussen 50 ° C tot 80 ° C of meer, belangrijk zijn in bepaalde soorten voedsel, zoals blik.

Microbiële kwantificering wordt uitgedrukt in kolonievormende eenheden (CFU) per gram of milliliter monster.

index

  • 1 Foundation
  • 2 Voorbereiding
    • 2.1 Voor de plaatgiettechniek
    • 2.2 Voor oppervlakteplanten
  • 3 Gebruik
    • 3.1 Plaatgiettechniek (bezaaid met diepte)
    • 3.2 Techniek gezaaid aan de oppervlakte
  • 4 Kwaliteitscontrole
  • 5 Beperkingen
  • 6 Referenties

stichting

Het standaard telmiddel is ontworpen om de bevredigende ontwikkeling van niet-veeleisende aerobe bacteriën mogelijk te maken, aangezien gistextract, tripheine en glucose de noodzakelijke voedingsstoffen voor een goede microbiële ontwikkeling bieden.

Anderzijds heeft het medium een ​​heldere kleur en een transparant uiterlijk, waardoor het ideaal is voor het weergeven van de kolonies die zijn ontwikkeld door de methode van diep zaaien (in een schaal gieten).

Het is ook mogelijk om kolonies te tellen door de methode van zaaien op het oppervlak met een spatel Drigalski.

Wanneer de microbiële belasting hoog is, moeten decimale verdunningen van het te onderzoeken monster worden gemaakt om de CFU's te tellen.

Opgemerkt moet worden dat dit medium wordt aanbevolen door de American Public Health Association (APHA) voor het tellen van aërobe mesofielen.

voorbereiding

Weeg 23,5 gr van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Om volledig te worden opgelost, moet het mengsel regelmatig worden geroerd totdat het kookt. De vervolgstappen zijn afhankelijk van de te gebruiken zaaitechniek.

Voor de plaatgiettechniek

Verdeel door 12 tot 15 ml in reageerbuizen te doseren. Vervolgens steriliseren in een autoclaaf bij 121 ° C gedurende 15 minuten. Sta toe om verticaal te stollen in de vorm van een blok. Bewaar in de koelkast tot gebruik.

Smelt de keu wanneer deze wordt gebruikt. Eenmaal gesmolten, bewaar het in een waterbad op 44-47 ° C terwijl monsters worden voorbereid.

Voor planten op het oppervlak

Steriliseer het medium in een autoclaaf bij 121 ° C en distribueer vervolgens 20 ml in steriele petrischalen. Sta laten stollen, inverteren en bewaren in een koelkast tot gebruik.

Tempereer de platen voor gebruik. De pH van het medium moet 7,0 ± 0,2 zijn.

gebruik

De agarstandaardtelling wordt gebruikt in de aërobe mesofielenteltechniek tijdens de microbiologische analyse van water en voedsel. Het tellen van aërobe mesofielen is noodzakelijk, omdat dit de hygiënische kwaliteit van het te onderzoeken monster bepaalt.

De toepassing van deze techniek (met behulp van dit medium) maakt de macroscopische visualisatie van geïsoleerde kolonies mogelijk voor hun kwantificering.

Plaque-giettechniek (bezaaid met diepte)

-procédé

De techniek bestaat uit het volgende:

1) Homogeniseer het monster om de aanwezige bacteriën te herverdelen.

2) Een initiële suspensie wordt uitgevoerd in een steriele flacon of zak, waarbij de verhouding 10 g of 10 ml monster in 90 ml verdunningsmiddel (10-1).

3) Vanaf de initiële suspensie worden de relevante decimale verdunningen gemaakt, afhankelijk van het type monster. Vb: (10-2, 10-3, 10-4). De verdunningen worden gemaakt met peptonwater of fosfaatbuffer.

Neem hiervoor 1 ml van de eerste suspensie en doe dit in 9 ml verdunningsmiddel, zet de verdunningen indien nodig voort en neem nu 1 ml van de verdunning in.-2 en ga zo maar door.

4) Neem 1 ml van elke verdunning en doe dit in lege steriele petrischalen.

5) Voeg aan elke plaat 12 tot 15 ml standaard tel-agar toe die eerder was gesmolten en op 44 - 47 ° C was ingesteld.

6) Geef soepele draaibewegingen aan de platen om het monster gelijkmatig over de agar te verdelen en laat stollen.

7) Omgekeerde platen en incuberen bij 37 ° C in aerobio gedurende 24 tot 48 uur.

8) Als de tijd voorbij is, ga je verder met het onderzoeken van de platen en tel je de kolonies in de verdunning die dit toelaat. Het is gekozen voor het tellen van die platen die tussen 30 en 300 CFU hebben.

Het tellen kan handmatig worden gedaan of de kolonietellerapparatuur kan worden gebruikt.

De toegestane waarden per ml monster kunnen van land tot land verschillen volgens de normen waaronder ze worden beheerst.

-Berekening van de UFC

De algemene berekening wordt gemaakt met behulp van de volgende formule:

Druk de resultaten uit in 1 of 2 cijfers, vermenigvuldig met de juiste basis 10. Voorbeeld: als het resultaat 16.545 is, wordt het afgerond op basis van het derde cijfer tot 17.000 en wordt het als volgt weergegeven: 1.7 x 104. Als het resultaat nu 16.436 is, wordt afgerond op 16.000 en wordt het uitgedrukt in 1.6 x 104.

Techniek geplant op het oppervlak

-procédé

-Inoculeren met 0,1 ml van het directe monster als het vloeibaar is, initiële suspensie 10-1 of van opeenvolgende verdunningen 10-2, 10-3 enz., in het midden van een standaard agarplaat.

-Verdeel het monster gelijkmatig met de Drigalski-spatel of L-vormige glasstaaf en laat 10 minuten staan.

-Omgekeerde platen en incuberen in aerobio bij 37 ° C gedurende 24 tot 48 uur.

-Ga verder met het tellen van de kolonies, kies die platen die liggen tussen 20 - 250 CFU.

-Berekening van de UFC

Voor de berekening wordt de verdunningsfactor toegepast, die de inverse is. Het getal wordt afgerond op 2 significante cijfers (afronding volgens het derde cijfer) en wordt uitgedrukt in basisvermogen 10. Als bijvoorbeeld 224 CFU in het monster worden geteld zonder verdunning (10-1), Is 22 x 10 gerapporteerd1  UFC, maar als het cijfer 225 was, wordt het 23 x 10 gerapporteerd1 UFC.

Nu, als u 199 CFU in verdunning 10 telt-3, 20 x 10 worden gerapporteerd4 UFC, maar als 153 CFU in dezelfde verdunning worden geteld, wordt 15 x 10 gerapporteerd4 UFC.

Kwaliteitscontrole

Het standaard telcultuurmedium kan worden geëvalueerd met behulp van bekende gecertificeerde stammen, zoals: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Als het kweekmedium in optimale omstandigheden is, wordt in alle gevallen een bevredigende groei verwacht, behalve voor L. fermentum die regelmatig kan optreden.

Om de steriliteit van het kweekmedium te beoordelen, moeten één of twee platen van elke bereide batch (niet-geënt) gedurende 24 uur bij 37 ° C in aerobio worden geïncubeerd. Aan het einde van deze periode mag geen groei of kleurverandering van het medium worden waargenomen..

beperkingen

-Smelt de agar niet meer dan één keer.

-Het geprepareerde medium kan tot 3 maanden meegaan zolang het in de koelkast wordt bewaard en tegen licht wordt beschermd.

-Dit medium is niet geschikt voor veeleisende micro-organismen, noch anaëroben.

referenties

  1. Nationale administratie van geneesmiddelen Voedsel en medische technologie (ANMAT). Microbiologische analyse van voedsel, officiële analytische methodologie, indicator micro-organismen. 2014 Volume 3. Beschikbaar bij: anmat.gov.ar
  2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Plate Count Agar. 2009. Beschikbaar op: http://f-soria.es
  3. Laboratoria Conda Pronadisa. Agar voor standaardmethoden (PCA) volgens APHA en ISO 4833. Beschikbaar op: condalab.com
  4. Laboratoria Britania. Tellen op agarplaat. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
  5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B en Velázquez O. 2009. Technieken voor de microbiologische analyse van voedingsmiddelen. 2e druk. Faculteit der Scheikunde, UNAM. Mexico. Beschikbaar bij: depa.fquim.unam