Agar EMB foundation, voorbereiding en gebruik



de EMB-agar is een selectief en differentieel vast kweekmedium dat wordt gebruikt voor de isolatie van Gram-negatieve bacillen, voornamelijk van de familie Enterobacteriaceae, en andere niet-veeleisende Gram-negatieve bacillen. Het is ook bekend onder het acroniem EAM, wat eosine-methyleenblauw betekent.

Dit medium is gemaakt door Holt-Harris en Teague in 1916. Het bevat pepton, lactose, sucrose, dikaliumfosfaat, agar, eosine, methyleenblauw en water. Het lijkt erg op MacConkey-agar, vooral als EMB-agar wordt gebruikt, gemodificeerd door Levine, dat geen sucrose bevat.

In feite beslist elk laboratorium of het met het een of het ander werkt, omdat ze dezelfde functie vervullen, hoewel ze biochemisch anders zijn.

Het heeft zelfs hetzelfde nadeel als de klassieke MacConkey agar in termen van zwermproductie door het geslacht Proteus. Daarom, om dit fenomeen te voorkomen, kunt u de concentratie van agar verhogen tot 5%.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Selectief
    • 1.2 differentieel
  • 2 Voorbereiding
  • 3 Gebruik
  • 4 Kwaliteitscontrole
  • 5 Laatste overwegingen
  • 6 Referenties

stichting

selectief

Het EMB-agar is subtiel selectief omdat het de anilinekleurstoffen (eosine en methyleenblauw) bevat, die werken als remmers, die de groei van de meeste Gram-positieve bacteriën en sommige veeleisende Gram-negatieve bacillen voorkomen..

Deze agar heeft echter het nadeel dat sommige Gram-positieve bacteriën de aanwezigheid van de remmende stoffen kunnen weerstaan ​​en groeien als kleine kleurloze puntvormige kolonies, zoals Enterococcus faecalis en wat Staphylococcus.

Je kunt ook bepaalde gisten laten groeien, zoals Candida albicans complex, Het geeft hele kleine roze kolonies. Zelfs chlamydosporen kunnen van deze gist worden ontwikkeld als het monster op diepte wordt gezaaid.

differentiaal

Aan de andere kant is EMB-agar ook een differentieel medium, omdat deze kleurstoffen samen (eosine en methyleenblauw) de eigenschap hebben om een ​​neerslag te vormen bij een zure pH, daarom dienen ze als indicatoren voor de productie daarvan..

Daarom produceren zwak fermenterende lactose of sucrose-bacteriën paarse kolonies in 24 tot 48 uur. Bijvoorbeeld de genera Klebsiella, Enterobacter en Serratia.

Die bacteriën die lactose sterk fermenteren, zoals Escherichia coli, of sucrose, zoals Yersinia enterocolitica of Proteus penneri, vormen een groenachtig zwart neerslag, dat een metaalachtige glans kenmerkt bij deze soorten.

Opgemerkt moet worden dat als het EMB levine medium wordt gebruikt (zonder sucrose), Yersinia enterocolitica en Proteus penneri ze zullen transparante kolonies produceren.

Bacteriën die geen lactose of sucrose fermenteren, worden gevoed door de aanwezigheid van peptonen, die zorgen voor de aminozuren en stikstof die nodig zijn voor de ontwikkeling van bacteriën en transparante kolonies produceren. Bijvoorbeeld de Salmonella- en Shigella-geslachten, onder anderen.

Evenzo is het belangrijk op te merken dat het geslacht Acinetobacter kolonies lavendelblauw kan presenteren, hoewel het geen fermentator van lactose is, noch sucrose, maar ze hebben de eigenschap methyleenblauw in de celwand te fixeren. Dit kan ook gebeuren met andere oxidatieve bacteriën.

voorbereiding

Het originele gedehydrateerde medium is lichtbeige.

Om dit kweekmedium te bereiden, moet 36 gram van het gedehydrateerde medium worden afgewogen en gesuspendeerd in een injectieflacon met één liter gedestilleerd water.

Nadat u het mengsel 5 minuten in rust hebt laten rusten, brengt u de fiola naar een warmtebron en mengt u krachtig en constant tot het kookt en volledig is opgelost..

Vervolgens moet het opgeloste kweekmedium 15 minuten worden gesteriliseerd met behulp van de autoclaaf bij 121 ° C.

Aan het einde van de tijd wordt het uit de autoclaaf verwijderd en even laten rusten. Vervolgens wordt het zelfs heet (45 - 50 ° C) geserveerd tussen 15 en 20 ml agar in elke steriele petrischaal. Het medium moet blauwe lakmos zijn.

Na het serveren worden de platen enigszins onbedekt gelaten totdat de agar een beetje afkoelt. Daarna zijn ze bedekt en mogen ze volledig stollen. Later worden ze geordend in een omgekeerde plaquehouder en bewaard in een koelkast (8 ° C) totdat ze worden gebruikt.

Deze procedure wordt bij voorkeur uitgevoerd in een laminaire stromingskap of voor de bunsenbrander om verontreiniging te voorkomen.

Het is belangrijk om te onthouden dat elk commercieel huis de te wegen hoeveelheid zal aangeven om het kweekmedium te bereiden.

De uiteindelijke pH van het medium moet 7,2 ± 0,2 zijn

toepassingen

Dit medium wordt gebruikt voor het zaaien van urine en ontlasting of voor elk type klinische monsters, vooral als de aanwezigheid van niet-veeleisende Gram-negatieve bacillen wordt vermoed, zoals bacillen die behoren tot de familie Enterobacteriaceae, die zeer goed groeit in dit medium.

De enteropathogene bacteriën van de geslachten Shigella en Salmonella onderscheiden zich door hun kleurloze of enigszins amberkleurige kolonies.

Andere niet-fermenterende lactose bacillen groeien ook, zoals Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, onder anderen..

Evenzo is dit medium zeer nuttig in de microbiologische analyse van voedsel en water, omdat het ideaal is voor de volledige bevestigingsfase van de bepaling van coliformen, dat wil zeggen om de aanwezigheid van coliformen te bevestigen. E. coli van troebele EC-bouillons, van de meest waarschijnlijke aantal techniek (NMP).

Kwaliteitscontrole

Om te verifiëren dat het nieuw gekweekte kweekmedium goed werkt, kunnen controlestammen worden geplant om de kenmerken van de kolonies te observeren en te verifiëren dat ze geven zoals verwacht.

Hiervoor, ATCC-stammen of goed geïdentificeerde stammen van E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa en sommige Gram-positieve bacteriën, zoals S. aureus.

Dat wordt verwacht E. coli Genereer goed ontwikkelde blauwzwarte kolonies met groene metaalglans. Zolang, Enterobacter aerogenes en Klebsiella sp ze moeten goed ontwikkelde slijmachtige kolonies blauwzwart maken.

Van zijn kant, Salmonella typhimurium en Shigella flexneri, ze moeten grote kolonies ontwikkelen, kleurloos of met een lichte barnsteenkleur.

Eindelijk het genre Pseudomonas aeruginosa het groeit als kleurloze kolonies van onregelmatige grootte, terwijl Gram-positieve bacteriën totaal moeten worden geremd of spaarzaam moeten groeien met zeer kleine kolonies.

Laatste overwegingen

Soms zorgt de sterilisatie ervoor dat het methyleenblauw vermindert, waarbij een oranje medium wordt waargenomen. Om het methyleenblauw te laten oxideren en de paarse kleur te herstellen, moet het voorzichtig worden gemengd totdat de kleur zich herstelt.

Ook, nadat de sterilisatie de kleurstof kan neerslaan, moet deze dus goed worden gemengd voordat de petrischalen worden geserveerd.

referenties

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B en Velázquez O. 2009. Technieken voor de microbiologische analyse van voedingsmiddelen. 2e druk. Faculteit der Scheikunde, UNAM. Mexico.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karakterisering en verdeling van stammen van Escherichia coli Potentieel pathogene isolaten van kippenvlees van Poultry Farms in Peru. Rev. onderzoek. dierenarts. Peru 2012 23 (2): 209-219. Beschikbaar op: scielo.org.
  3. Laboratoria Conda S.A. Eosin Agar en Methyleen Blue. 2010. Beschikbaar op: condalab.com
  4. Laboratoria Britania. Levine E.M.B (met Eosin en Methylene Blue) 2011. Beschikbaar op: britanialab.com
  5. BD Laboratories BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), gemodificeerd. 2013. Beschikbaar op: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5de ed.). Argentinië, redactie Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Argentinië. Panamericana S.A Editorial