Agar Endo foundation, voorbereiding en gebruik

de Endo agar of medium Endo is een vast, differentieel kweekmedium met een zekere mate van selectiviteit. De oorspronkelijke formule werd in 1904 door Endo gemaakt om onderscheid te maken tussen lactose-fermenterende bacteriën en niet-fermenterende bacteriën. In het begin was het bedoeld voor de isolatie van Salmonella typhi, maar later richtte het medium zich op het zoeken naar coliformen.

Het principe van Endo-agar is gehandhaafd, maar de formulering ervan heeft in de loop van de jaren ontelbare veranderingen ondergaan. Momenteel wordt het medium uit peptische digest van dierlijk weefsel, lactose, dikalium waterstoffosfaat, natrium sulfiet, basis fuchsine en agar.

Het belangrijkste gebruik van het medium is gekoppeld aan de isolatie en differentiatie van Gram-negatieve bacillen die behoren tot de familie Enterobacteriaceae en andere naburige families..

Lang werd gebruikt bij de detectie van coliform in watermonsters, voedsel en zuivel, maar nu is bewogen met deze medium soortgelijke functies. Sommige microbiologische laboratoria gebruiken deze agar echter voor de isolatie van Enterobacteriaceae uit monsters van klinische oorsprong.

index

• 1 Foundation
• 2 Voorbereiding
  • 2.1 Endo agar
  • 2.2 Variant van agar m-Endo
• 3 Gebruik
• 4 Kwaliteitscontrole
• 5 Beperkingen
• 6 Referenties

stichting

Endo-agar bevat peptonen die dienen als een bron van aminozuren, stikstof, koolstof en energie, noodzakelijk voor de groei van niet veeleisende micro-organismen.

Aan de andere kant wordt het enigszins selectieve karakter van de agar verschaft door de toevoeging van natriumsulfiet en basisch fuchsine; beide componenten remmen de ontwikkeling van de meeste Gram-positieve bacteriën gedeeltelijk of volledig af.

Het differentiële karakter wordt gegeven door de aanwezigheid van fermenteerbare koolhydraten, wat in dit geval lactose en basisch fuchsine is, dat ook als indicator van pH dient.

Gram-negatieve bacteriën die op deze agar groeien en die lactose kunnen fermenteren, zullen sterke roze kolonies vormen; pathognomonisch zijn van Escherichia coli de vorming van donkerrode kolonies met een groene metaalachtige glans iriserend. Dit komt door de hoge productie van zuren uit de fermentatie van koolhydraten.

Opgemerkt moet worden dat het medium rond de koloniën ook een sterke roze kleur krijgt. Terwijl niet-fermenterende gram-negatieve bacillen van lactose lichtroze kolonies vormen vergelijkbaar met medium of kleurloos.

Dipaliumwaterstoffosfaat brengt de pH van het medium in evenwicht en de agar is het bestanddeel dat de vaste consistentie verschaft.

voorbereiding

Endo Agar

Weeg 41,5 gr van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Verwarm het mengsel door regelmatig te roeren totdat het medium volledig is opgelost. Steriliseer in de autoclaaf bij 121 ° C, bij 15 lb.druk, gedurende 15 minuten.

Laat het afkoelen tot een temperatuur van ongeveer 45-50 ° C bij het uit de autoclaaf verwijderen, schud het mengsel voor het serveren homogeniseert. Giet 20 ml in steriele petrischalen.

Laat de platen stollen, inverteren en in een doos opslaan of wikkelen met donker papier voordat ze in de koelkast worden bewaard. Het is heel belangrijk om het voorbereide medium te beschermen tegen direct licht. Een aanbevolen praktijk is om het exacte bedrag voor te bereiden dat nodig zal zijn.

Als ze in de koelkast worden bewaard, moeten ze vóór gebruik worden getemperd.

De pH van het medium moet tussen 7,2 en 7,6 liggen en de kleur van het geprepareerde medium is lichtroze..

Variant agar m-Endo

Een andere versie van Endo agar (m-Endo) volgens de formule van McCarthy, Delaney en Grasso, die meer verbindingen en varieert in de preparaatvorm.

Deze variant bevat: lactose tryptose, gedigereerd caseïne enzymatisch gedigereerd enzym van dierlijk weefsel, natrium-, kaliumfosfaat dibasisch, natriumsulfiet, gistextract, monobasisch kaliumfosfaat, basisch fuchsine, natriumdeoxycholaat chloride, sulfaat van natrium en agar.

In dit geval wegen we 51 g van het gedehydrateerde medium en suspenderen het in 1 liter gedestilleerd water dat 20 ml ethanol bevat.

Verwarm licht terwijl je roert tot het medium volledig is opgelost. Niet oververhitten en niet steriliseren in een autoclaaf. Zodra het mengsel homogeen is, serveer in steriele petrischalen en laat stollen.

gebruik

In sommige landen wordt het nog steeds gebruikt voor het tellen van totale en fecale coliformen in water- en voedselmonsters, vooral de aanwezigheid van Escherichia coli als de belangrijkste indicator van fecale besmetting.

M-Endo Agar wordt aanbevolen door de American Public Health Association (APHA) voor het bewaken en controleprogramma's desinfectie en afvalwaterbehandeling, alsook de beoordeling van de kwaliteit van het drinkwater.

De meest gebruikte methode is membraanfiltratie, na verrijking van het monster met Lauryl sulfaatbouillon gedurende 2 tot 4 uur.

Het kan ook worden gebruikt als vervanging voor EMB agar in microbiologische analyse van voedsel en water het meest waarschijnlijke aantal techniek (NMP), met name in de volledige stopzetting bevestigende de aanwezigheid van bevestigen E. coli van troebele EC-bouillons.

Kwaliteitscontrole

Om de kwaliteit van de bereide Endo agar-batch te evalueren, worden bekende of gecertificeerde controlestammen gezaaid.

Tot de soorten die voor dit doel kunnen worden gebruikt, behoren: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 en Enterococcus faecalis ATCC 11700.

De stammen worden gezaaid door uitputting en 24 uur geïncubeerd bij 37 ° C in aerobiose.

De verwachte resultaten zijn:

• naar Escherichia coli: koloniën sterk rood, met metaalachtige glans.
• naar E. cloacae en K. pneumoniae de kolonies moeten roze mucoïde zijn.
• In het geval van S. typhimurium, S. flexneri en P. mirabilis de kolonies zijn meestal lichtroze of kleurloos.
• eindelijk, E. faecalis het is naar verwachting gedeeltelijk geremd, daarom moet de groei ervan slecht zijn met zeer kleine kolonies met sterk roze.

beperkingen

-Het Endo-medium heeft een laag selectief vermogen, daarom is het mogelijk dat sommige Gram-positieve micro-organismen zoals Staphylococcus, Enterococcus en zelfs gisten kunnen groeien.

-Andere bacillen die niet behoren tot de familie Enterobacteriaceae kunnen zich in dit medium ontwikkelen, zoals bijvoorbeeld Pseudomonas sp en Aeromonas sp. De kenmerken van deze stammen zijn kleurloze, onregelmatige kolonies.

-Dit voorbereide medium is zeer gevoelig voor licht, waardoor een langdurige blootstelling hieraan het indicatorsysteem verslechtert, waardoor het medium onomkeerbaar wordt beschadigd..

-De componenten van het medium worden als kankerverwekkend beschouwd, daarom moet direct contact worden vermeden.

-Het gedehydrateerde medium is zeer hygroscopisch en moet worden bewaard in de originele verpakking bij kamertemperatuur, goed gesloten en in een droge omgeving.

referenties

1. BD Laboratories Endo Agar. 2013. Beschikbaar op: bd.com
2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Beschikbaar bij: foodsafety.neogen.com
3. "Agar Endo." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 7 sep. 2017, 08:27 UTC. 28 februari 2019, 22:55. Beschikbaar in: en.wikipedia.
4. MercK-laboratorium. Endo agar 2019. Beschikbaar op: merckmillipore.com
5. Laboratories Technische fiche. M - Verwijder Agar LES. 2015. Beschikbaar op: liofilchem.net