Agar Hektoen foundation, voorbereiding en gebruik



de Hektoen agar of enterische Hektoen-agar is een vast, selectief en differentieel kweekmedium. Het werd gecreëerd door King en Metzger aan het Hektoen-instituut voor de isolatie van enteropathogene bacteriën van de geslachten Shigella en Salmonella..

Het medium is samengesteld uit proteose pepton, gistextract, galzouten, lactose, sucrose, salicine, natriumthiosulfaat, natriumchloride, ijzercitraat, ammoniumcitraat, broomthymolblauw, zuurfuchsine en agar. Deze formulering maakt het mogelijk de geslachten Shigella en Salmonella te onderscheiden van de rest van de bacteriën die in dit medium kunnen groeien.

Hoewel er andere middelen zijn met dezelfde functie als Hektoen-agar, biedt dit een groter voordeel ten opzichte van andere middelen, vooral wanneer u Shigella-soorten wilt terugwinnen..

Soorten van beide genera produceren ernstige gastro-intestinale problemen bij de mens als gevolg van de consumptie van besmet voedsel; daarom is de overdracht fecaal - oraal. Daarom is het gebruik van Hektoen-agar vooral geïndiceerd in de microbiologische analyse van ontlasting- en voedselmonsters..

index

  • 1 Foundation
  • 2 Voorbereiding
  • 3 Gebruik
  • 4 Kwaliteitscontrole
  • 5 Beperkingen
  • 6 Referenties

stichting

Hektoen-agar bevat peptonen en gistextract als voedingsbron en vormt de essentiële elementen voor microbiële ontwikkeling.

Het heeft echter ook galzouten die werken door de groei van sommige bacteriën te remmen, in het bijzonder Gram-positief en sommige Gram-negatief. Het is om deze reden dat het wordt beschouwd als een selectief medium.

Aan de andere kant is Hektoen-agar een differentieel medium. Deze eigenschap wordt verleend door de aanwezigheid van fermenteerbare koolhydraten zoals lactose, saccharora en salicine, samen met het pH-indicatorsysteem, weergegeven door broomthymolblauw en zuurfuchsine..

Alle bacteriën die in dit medium kunnen groeien en niet behoren tot het geslacht Salmonella en Shigella zullen zalm- of oranje kolonies ontwikkelen, met uitzondering van het geslacht Proteus. Dit komt door de fermentatie van een of meer van de aanwezige koolhydraten, die het medium verzuurt, waardoor de pH-indicator gaat draaien.

Het geslacht Shigella en Salmonella van zijn kant zijn niet in staat om te fermenteren tot een van de aanwezige koolhydraten, waarbij alleen de peptonas als energiebron worden gebruikt, die het milieu alkaliseren en daarom zijn de kolonies blauwgroen.

Ook in dit medium kunnen bacteriën worden onderscheiden die in staat zijn waterstofsulfide (kleurloos gas) te vormen. Natriumthiosulfaat werkt als een bron van zwavel, terwijl ijzercitraat het onthullende middel is. Beide verbindingen maken de vorming mogelijk van een zwart neerslag van ijzersulfide dat de reactie aantoont.

Het zwarte neerslag in het midden van de kolonie met een transparante halo rond geeft een visoog uitstraling. Dit kenmerk suggereert de aanwezigheid van het geslacht Salmonella.

Ten slotte handhaaft natriumchloride de osmotische balans en geeft de agar de vaste consistentie aan het medium.

voorbereiding

Weeg 76 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Schud het mengsel krachtig en laat het dan 10 tot 15 minuten rusten. Het kan worden verwarmd en gekookt, waarbij rotatiebewegingen worden gegeven tot het volledig is opgelost. Dit medium is niet geautoclaveerd.

Wanneer het medium een ​​temperatuur van ongeveer 45 ° C bereikt, wordt een volume van 20 ml direct in steriele petrischalen gegoten..

De agar laat stollen. Op dat moment zijn ze klaar voor gebruik. Het is raadzaam om ze onmiddellijk te gebruiken. Als dit niet mogelijk is, moeten ze in de koelkast worden bewaard totdat ze worden gebruikt.

De platen moeten vroeg uit de koelkast worden verwijderd voordat ze worden geplant om op kamertemperatuur te komen.

De pH van het medium moet 7,5 ± 0,2 zijn. De kleur van het gedehydrateerde medium is paars en bereid is bruinachtig groen.

gebruik

Het gebruik van Hektoen-agar wordt aanbevolen voor het zoeken naar bacteriën van het geslacht Shigella en Salmonella in ontlasting- en voedselmonsters..

De mogelijkheid om deze bacteriën te isoleren is sterk toegenomen als het monster eerder is verrijkt met speciale bouillons, zoals selenietkweek, selenietcystinebouillon, tetrathionaatkweekvloeistof, enz..

Het inoculum moet sterk zijn en het zaaien gebeurt door striation. De platen worden gedurende 24 tot 48 uur bij 37 ° C geïncubeerd in aerobiose.

Incubatie wordt aanbevolen gedurende 48 uur omdat de kenmerken van de kolonies op dit moment duidelijker zijn voor hun interpretatie en differentiatie.

Kwaliteitscontrole

Voor kwaliteitscontrole op dit medium worden gecertificeerde bacteriestammen gebruikt, zoals: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 en Shigella sonnei ATCC 25931.

De verwachte resultaten zijn de volgende: Salmonella typhimurium en  Salmonella enteritidis ze moeten groenblauwe kolonies ontwikkelen met of zonder een zwart centrum. Terwijl de Shigella-soort zal groeien als blauwgroene kolonies.

Je kunt ook soorten van opnemen Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 en Staphylococcus aureus ATCC 25923.

In deze gevallen zijn de waargenomen kenmerken de volgende: E. coli en K. pneumoniae In dit medium zullen ze zalm-tot-oranje kolonies ontwikkelen, met een neerslag van dezelfde kleur eromheen. Ondertussen zal Proteus blauwgroene kolonies ontwikkelen met of zonder een zwart centrum.

terwijl S. aureus en  E. faecalis moet worden geremd, soms E. faecalis slaagt erin om te groeien als gele kolonies, erg klein.

Aan de andere kant, omdat dit medium niet in een autoclaaf wordt gesteriliseerd, is het belangrijk om de steriliteit van het medium te evalueren. Daarom moet elke bereide batch een tot twee platen worden geïncubeerd zonder 24 uur bij 37 ° C te inoculeren in aerobiose.

Vanzelfsprekend wordt verwacht dat er geen enkele soort op de plaat groeit.

beperkingen

-Proteus soorten kunnen zich in deze omgeving ontwikkelen en de eigenschappen van hun kolonies kunnen verward worden met Salmonella of Shigella soorten. Om deze reden moet elke verdachte kolonie worden bevestigd met biochemische tests.

-Het gebruik van dit medium moet gepaard gaan met andere, minder selectieve agars, omdat als het gezochte micro-organisme in lage concentraties wordt aangetroffen, het zich mogelijk niet in dit medium zal ontwikkelen..

-Tijdens de bereiding niet oververhitten, omdat overmatige hitte de samenstelling van het medium verandert.

-Ongebruikelijk lactose-fermenterende Salmonella-kolonies kunnen onopgemerkt blijven.

referenties

  1. Bijdragers van Wikipedia. Hektoen enterische agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 13 maart 2019, 23:38 UTC. Beschikbaar op: .wikipedia.org / Betreden 16 maart 2019.
  2. BD Laboratories BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Beschikbaar op: bd.com
  3. Laboratoria Britania. Hektoen Enterisch Agar. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen agar. Beschikbaar bij: f-soria.es
  5. Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2e editie. Beschikbaar in: bd.com/europe