Agar LIA (Lysine Iron) foundation, bereiding en toepassingen

de LIA-agar (Lysine Iron) is een biochemische test die wordt gebruikt om bacteriën van de familie Enterobacteriaceae te identificeren. Dit medium is gemaakt door Edwards en Fife, gebaseerd op de formule van Falkow.

Oorspronkelijk was deze test een bouillon die peptonen, gistextract, glucose, L-lysine, broomcresolpaars en gedestilleerd water bevatte. Edwards en Fife voegden agar-agar, ferri-ammoniumcitraat en natriumthiosulfaat toe.

De test bestaat in wezen uit het aantonen van de aanwezigheid van het enzym lysine decarboxylase, in staat om te reageren met de carboxylgroep van het aminozuur L-lysine. Een deaminatie van het aminozuur kan ook plaatsvinden vanwege de aanwezigheid van het enzym lysine-deaminase.

Bovendien maakt de samenstelling van het medium het mogelijk om het vermogen van sommige bacteriesoorten om waterstofsulfide te produceren aan te tonen. Ten slotte is het ook mogelijk om het genereren van gas in het midden te observeren of niet.

index

• 1 Foundation
  • 1.1 Peptonen en gistextract
  • 1.2 Glucose
  • 1,3 L-lysine
  • 1.4 pH-indicator (broomcresolpaars)
  • 1.5 Ammoniumijzercitraat en natriumthiosulfaat
• 2 Interpretatie van de test
  • 2.1 Decarboxylatie van lysine
  • 2.2 Deaminatie van lysine
  • 2.3 Productie van waterstofsulfide (H2S)
• 3 Verslag van resultaten
• 4 Voorbereiding
• 5 Gebruik
• 6 Referenties

stichting

Peptonen en gistextract

Zoals de meeste kweekmedia bevat ijzer-lysine-agar componenten die de bron van voedingsstoffen leveren die nodig is voor bacteriegroei. Deze componenten worden weergegeven door peptonen en gistextract.

glucose

Ook bevat deze agar fermenteerbare koolhydraatglucose. Het is bekend dat alle bacteriën van de familie Enterobacteriaceae glucose fermenteren.

Deze stap is cruciaal, omdat het verantwoordelijk is voor het verzuren van het medium, een essentiële voorwaarde voor het enzym lysine decarboxylase, indien aanwezig, om op het substraat in te werken.

In sommige bacteriesoorten kan de gasproductie als gevolg van de fermentatie van glucose worden waargenomen.

Het gas wordt bewezen wanneer er een verplaatsing van de agar in de buis is, waardoor een lege ruimte in de bodem van de buis achterblijft, of door het medium in twee of meer gedeelten te breken.

L-lysine

Zodra het lysine gedecarboxyleerd is, worden een diamine (cadaverine) en koolstofdioxide gevormd.

Decarboxylatie vindt plaats in de aanwezigheid van het co-enzym pyridoxaalfosfaat. Deze reactie is onomkeerbaar.

PH-indicator (broomcresol paars)

Alle pH-veranderingen in het medium door de verschillende reacties, worden gedetecteerd door de broomcresol paarse pH-indicator.

In deze zin, als er verzuring is, wordt het medium geel en wanneer er alkalisatie is, keert het medium terug naar de oorspronkelijke paarse of paarse kleur.

Wanneer deaminatie van lysine plaatsvindt door de aanwezigheid van het enzym lysine-deaminase, vormt zich op het oppervlak een roodachtige kleur, typisch in de geslachten Proteus, Providencia en sommige soorten van Morganella.

Dit komt door het feit dat tijdens het deamineringsproces alfa-keto-carbonzuur wordt gevormd, dat reageert met ammoniumcitraat in aanwezigheid van zuurstof, dat de bovengenoemde kleur veroorzaakt.

Ammoniumijzercitraat en natriumthiosulfaat

Aan de andere kant zullen de bacteriën die waterstofsulfide produceren, worden aangetoond door de aanwezigheid van natriumthiosulfaat (bron van zwavel) en ijzer (III) ammoniumcitraat, dat de ontwikkelaar is van H₂S.

Bacteriën die thiosulfaatreductase-enzym bezitten, hebben het vermogen om te werken door het aanwezige natriumthiosulfaat te reduceren, waardoor sulfiet en waterstofsulfide (H₂S).

Dit laatste is een kleurloos gas, maar als het reageert met het ijzerzout vormt dit metaalferrosulfide, dat een onoplosbare verbinding is (zichtbaar zwart neerslag).

Echter, de capaciteit van H-vorming₂S met dit medium is niet erg betrouwbaar, omdat sommige negatieve lysine-decarboxylase-bacteriën H kunnen produceren₂S zal niet het zwarte neerslag vormen, omdat de zuurgraad van het medium interfereert. Daarom wordt aanbevolen om te controleren met andere middelen die ijzer bevatten.

Interpretatie van de test

Decarboxylatie van lysine

De buizen moeten worden gelezen na het einde van de incubatieperiode van 24 uur, anders bestaat het risico dat de reactie verkeerd wordt geïnterpreteerd, waardoor valse negatieven worden gemeld.

Men moet niet vergeten dat de eerste reactie die zal plaatsvinden de fermentatie van de glucose zal zijn, daarom zullen alle buizen na 10 tot 12 uur geel worden.

Als aan het einde van de incubatieperiode (24 uur) een gele achtergrond met een paars of paars oppervlak wordt waargenomen, is de reactie negatief. De paarse kleur van het oppervlak komt overeen met de alkalinisatie van het medium door het gebruik van peptonen.

Een positieve reactie is een reactie waarbij de onderkant en het oppervlak van de buis volledig paars zijn, dat wil zeggen dat deze terugkeert naar de oorspronkelijke kleur.

Daarom, wie bepaalt de positiviteit van de test is de basis of onderkant van het medium. Als je twijfelt over de kleur, kun je het vergelijken met een niet-geïnoculeerde LIA-buis.

Deaminatie van lysine

Een buis die de deaminering van lysine aantoont, heeft een roodachtig bruin oppervlak en een gele achtergrond (zuur), of de hele roodachtig bruine buis..

Deze reactie wordt geïnterpreteerd als negatief voor de decarboxylatie van lysine, maar positief voor deaminatie van lysine.

Deze reactie wordt gedefinieerd en geïnterpreteerd in de schuine kant.

Productie van waterstofsulfide (H.₂S)

Een positieve reactie wordt waargenomen door het verschijnen van een zwart neerslag in het gehele of een deel van het medium. Over het algemeen tussen de schuine rand en de basis.

Als het precipitaat door de hele buis heen komt, zal het niet de andere reacties in het medium laten zien.

Record van de resultaten

Bij het interpreteren van de test worden de resultaten als volgt geregistreerd:

Lees eerst de afschuining, dan de bodem of taco, dan de productie van H₂S, en tenslotte gasproductie.

Voorbeeld: K / A + (-). Dit betekent:

• K: Alkaline bezel (paars)
• A: Zure (gele) achtergrond, dat wil zeggen negatieve decarboxyleringsreactie en negatieve deaminatie.
• +: Productie van waterstofsulfide
• (-): Zonder gas.

voorbereiding

Weeg 35 g lysine agar gedehydrateerd ijzer af en los op in 1 liter gedestilleerd water.

Verwarm tot de agar volledig is opgelost, kook deze dus een minuut lang regelmatig. Verdeel 4 ml van het medium in 13/100 reageerbuisjes met katoenen deksel.

Steriliseer in een autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Verwijderen uit de autoclaaf en laten rusten op een hellende manier, zodanig dat er een diepe basis en een korte afschuining is.

Bewaren in de koelkast 2-8 ° C. Laten temperen voordat de bacteriestam wordt geplant.

De kleur van het gedehydrateerde medium is beige en het medium is roodachtig paars van kleur.

De uiteindelijke pH van het bereide medium is 6,7 ± 0,2.

Het medium wordt geel met een pH gelijk aan of minder dan 5,2 en paars bij een pH van 6,5.

toepassingen

Deze test, samen met andere biochemische tests, wordt gebruikt om bacillen van de familie Enterobacteriaceae te identificeren..

Het medium wordt gezaaid met een rechte lus of naald, een of twee stoten worden gemaakt aan de onderkant van de buis, en dan is het oppervlak van het medium zigzaggend.

Het wordt gedurende 24 uur geïncubeerd bij 35-37 ° C in aerobiose. Indien nodig blijft het 24 uur langer incuberen.

Het is vooral nuttig om negatieve Citrobacter-lactosespecies te onderscheiden van Salmonellas sp.

referenties

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemische tests voor de identificatie van bacteriën van klinisch belang. 3e druk Redactioneel Panamericana. Buenos Aires Argentinië.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
4. Laboratoria Britania. Lysine-ijzer-agar. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
5. BD Laboratories BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Beschikbaar op: bd.com
6. Valtek Laboratories Medium L.I.A. 2009. Beschikbaar op: andinamedica.com