Pepton water foundation, voorbereiding en gebruik

de peptonada water het is een niet-selectief vloeibaar verrijkingsmedium, hoofdzakelijk gebruikt als een verdunningsmiddel voor voedselmonsters of andere materialen. Dit betekent vanuit chemisch oogpunt heel eenvoudig, bevat pepton van vlees, natriumchloride en water.

Het heeft een bepaalde voedingswaarde, waardoor het monster kan worden verrijkt. Als er gehavende bacteriën zijn, heeft dit middel de mogelijkheid om de levensvatbaarheid te herstellen. Het is vooral nuttig bij het herstel van bacteriën die behoren tot de familie Enterobacteriaceae.

In het geval van het herstel van Salmonellas wordt het gebruik van de gebufferde peptonada-watervariant aanbevolen; Dit dient als een middel voor voorverrijking van het monster, in dit geval bevat het andere elementen zoals dinatriumfosfaat en dikaliumfosfaat.

Normaal wordt peptonada-water bereid bij een neutrale pH, maar er zijn andere varianten waarbij het noodzakelijk is dat de pH 8,5 ± 0,2 (alkalisch) is, omdat de te isoleren bacteriën alkalofiel is, zoals de Vibrio cholerae.

Anderzijds kan dit medium worden gebruikt als een basismedium voor koolhydraatfermentatietests.

index

• 1 Foundation
• 2 Voorbereiding
  • 2.1 Huisvoorbereiding (niet-commercieel)
  • 2.2 Voorbereiding met commercieel medium
  • 2.3 Voorbereiding voor fermentatietesten
  • 2.4 Andere varianten van peptonada-water
• 3 Gebruik
  • 3.1 Ontlastingsmonsters
  • 3.2 Voedingsmonsters
• 4 Kwaliteitscontrole
• 5 Beperkingen
• 6 Referenties

stichting

Peptonen bieden de voedingsstoffen die nodig zijn voor de ontwikkeling van bacteriën, vooral stikstof en aminozuren met een korte keten, terwijl natriumchloride de osmotische balans handhaaft.

Bovendien maakt het medium dispersie, homogenisatie en reparatie van bacteriële cellen mogelijk die zijn beschadigd door industriële processen..

Als verdunningsmiddel is het ideaal en vervangt het effectief de fysiologische oplossing (SSF) of de fosfaatbuffer (PBS).

Bacteriegroei is duidelijk door de troebelheid ervan te observeren.

voorbereiding

Zelfgemaakte bereiding (niet-commercieel)

Weeg 1 g pepton en 8,5 g natriumchloride af, los op in 1 liter gedestilleerd water. De pH moet worden aangepast naar 7,0. Hiervoor kunt u 1 N natriumchloride gebruiken.

Voorbereiding met commercieel medium

Weeg 15 gr van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Homogeniseer het mengsel. Indien nodig wordt het mengsel gedurende 1 minuut gekookt om totale oplossing te helpen. Dien op in flacons van 100 ml of in tubes van 10 ml, indien nodig. Autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C.

Koel en gebruik of bewaar in de koelkast. De uiteindelijke pH van het medium is 7,2 ± 0,2.

De kleur van het gedehydrateerde medium is lichtbeige en bereid is licht barnsteen.

Voorbereiding voor fermentatietesten

Bij de vorige bereiding - vóór sterilisatie - moet het koolhydraat worden toegevoegd tot een eindconcentratie van 1%, plus de Andrade-indicator (zuur fuchsine) of fenolrood (0,018 g / l). Een Durham-klok voor observatie van gasvorming moet op de buizen worden geplaatst.

Andere peptonada-watervarianten

-Pepton water gebufferd of gebufferd

Het bevat caseïne-enzymatisch hydrolysaat, natriumchloride, kaliumdiwaterstoffosfaat en natriumwaterstoffosfaat-dodecahydraat. De uiteindelijke pH is 7,0 ± 0,2.

Meng voor de bereiding 20 g van het gedehydrateerde medium en los op in 1 liter gedestilleerd water. Laat ongeveer 5 minuten staan. Verwarm gedurende 1 minuut totdat het volledig is opgelost.

Giet indien nodig in geschikte flessen. Steriliseer gedurende 15 minuten met behulp van de autoclaaf bij 121 ° C.

-Alkaline peptoned water

Weeg 25 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter water. Ga verder zoals hierboven beschreven. De pH varieert van 8,3 tot 8,7.

gebruik

Het inoculum wordt uitgevoerd door het monster direct te plaatsen.

Het wordt gebruikt om de monsters te verdunnen, vooral wanneer het vermoeden bestaat dat er mogelijk beschadigde bacteriën zijn. Gewoonlijk zijn de verdunningen 1:10 en 1: 100.

Incubeer gedurende 24 uur in aerobio bij 35-37 ° C.

Ontlasting monsters

Voor ontlastingsmonsters die Salmonella zoeken, wordt het gebruik van gebufferd of gebufferd water als een pre-verrijkingsmedium aanbevolen..

Om dit te doen, gaat u als volgt te werk:

Als de ontlasting wordt gevormd, neem dan 1 g monster. Als ze vloeibaar zijn, neem dan 1 ml ontlasting en suspendeer in een buisje met 10 ml gebufferd peptonwater. In het geval van rectale swabs, ontlaadt u het materiaal in het staafje in de buis met gebufferd, gepeptoneerd water.

Meng en homogeniseer het monster in alle gevallen heel goed.

Incubeer bij 37 ° C gedurende 18 tot 24 uur. Vervolgens sub-cultiveren in een verrijkingsvloeistof zoals selenietcystinebouillon of tetrathionaatmedium gedurende 18-24 uur bij 37 ° C. Tenslotte cultiveren in selectieve media voor Salmonella, zoals SS-agar, XLD-agar, Hektoen-agar, onder andere.

Voedsel monsters

Peptonwater wordt gebruikt als een verrijkingsmedium of als een eenvoudig verdunningsmiddel, maar als Salmonella-soorten worden gezocht, wordt het gebruikt als een pre-verrijkingsmedium, zoals reeds is beschreven..

In voedingsmiddelen gaat u als volgt te werk:

Voor vast voedsel weegt 25 gr van het monster en voor vloeibare voedingsmiddelen meet 25 ml ervan. Plaats dat gedeelte in kolven met 225 ml gepeptoneerd water. Meng en homogeniseer het monster.

Als wordt vermoed dat de microbiële belasting hoge seriële verdunningen of decimalen zijn om het tellen van kolonievormende eenheden (CFU) te vergemakkelijken..

Het aantal verdunningen hangt af van het type monster en de analytische ervaring.

Als daarentegen wordt vermoed dat de microbiële belasting erg laag is, is het niet nodig verdunningen te maken. Subcultiveer vervolgens in selectieve media.

In het geval van voedsel uit de zee, zoals zeevruchten, vis, onder andere op zoek naar Vibrio cholerae of andere Vibrio-soorten, moet peptonwater worden ingesteld op pH 8,5 (alkalisch gepeptoneerd water).

Kwaliteitscontrole

Van elke bereide partij moeten één tot twee buizen worden geïncubeerd zonder inoculatie gedurende 24 uur in aerobiosis bij 37 ° C. Aan het einde van de tijd moet er geen troebelheid of kleurverandering worden waargenomen.

Ook kunnen bekende controlestammen worden gebruikt om hun effectiviteit te evalueren:

Hiervoor kunnen de volgende bacteriestammen worden gebruikt: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

In alle gevallen wordt een bevredigende microbiële ontwikkeling verwacht, die wordt waargenomen door troebelheid van het medium.

beperkingen

-Het gedehydrateerde medium is zeer hygroscopisch, dus het moet uit de buurt van vocht worden gehouden.

-Het medium mag niet worden gebruikt als een soort verslechtering wordt waargenomen.

-Het gedehydrateerde kweekmedium moet worden bewaard tussen 10 - 35 ° C

-Het bereide medium moet gekoeld bewaard worden (2-8 ° C).

referenties

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B en Velázquez O. Techniques for the Microbiological Analysis of Foods. 2009, 2e druk. Faculteit der Scheikunde, UNAM. Mexico. Versie voor beheerder van handboeken en documenten (AMyD) van de faculteit scheikunde, UNAM 1. Beschikbaar op: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratoria Britania. Gebufferd peptonada-water. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Pepton water. Beschikbaar bij: foodsafety.neogen.com
4. Laboratoria Britania. Pepton water. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
5. Merck Laboratories Gebufferd peptonwater. Beschikbaar bij: merckmillipore.com
6. Laboratoria Conda Pronadisa. Alkaline peptoned water. Beschikbaar bij: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.