EC bouillon foundation, bereiding en toepassingen

de EC-bouillon of bouillon Escherichia coli Het is een selectief vloeibaar kweekmedium. Dit medium wordt aanbevolen door de standaardmethoden voor het tellen van totale en fecale coliformen, volgens de techniek van het meest waarschijnlijke aantal (NMP) in water- en voedselmonsters, waarbij het belangrijkste agens de Escherichia coli.

De EC-bouillon is samengesteld uit tripteïne, lactose, galzouten, dikaliumfosfaat, monokaliumfosfaat, natriumchloride en water. De formule is strategisch ontworpen om de groei van totale en fecale coliformen te bevorderen en de ontwikkeling van andere begeleidende micro-organismen te voorkomen.

De bacterie Escherichia coli is het belangrijkste fecale coliform dat aanwezig is als een contaminant in water en voedselbronnen, met belangrijke gastro-intestinale aandoeningen tot gevolg.

Opgemerkt moet worden dat er veel serotypen van zijn Escherchia coli; onder hen kunnen we de enterohemorrhagische (EHEC), entero-invasieve (EIEC), enteropathogene (EPEC), enterotoxigene (ETEC) en enteroaggregatieve (EAEC).

Dit betekent dat het in staat is om ze allemaal te ontwikkelen, maar zonder onderscheid te kunnen maken. Om dit te doen, moeten aanvullende tests worden uitgevoerd.

De microbiologische studie van water en voedsel met het meest waarschijnlijke aantal (NMP) voor het opzoeken van totale en fecale coliformen is een protocol dat in verschillende fasen verloopt; vermoedelijke fase, bevestigingsfase en voltooiingsfase. De EC-bouillon wordt gebruikt in de bevestigingsfase.

index

• 1 Foundation
  • 1.1 EC-bouillon
  • 1.2 EC-bouillon gemodificeerd met novobiocine
• 2 Voorbereiding
  • 2,1 EC-bouillon
  • 2.2 EC-bouillon gemodificeerd met novobiocine
• 3 Gebruik
  • 3.1 Analyse van totale en fecale coliformen
• 4 Kwaliteitscontrole
• 5 Aanbevelingen
• 6 Referenties

stichting

EC Bouillon

Het EC-medium is gebaseerd op het verstrekken van de nodige voedingselementen voor de optimale ontwikkeling van totale en fecale coliformen, waarbij de bacterie is opgenomen Escherichia coli.

Deze voedingselementen worden geleverd door tripteïne en zijn een uitstekende bron van peptiden en aminozuren. Daarnaast bevat het ook lactose, een fermenteerbaar koolhydraat dat energie levert en laat zien of de bacteriën gas produceren.

Aan de andere kant bevat het medium galzouten die het selectieve karakter verschaffen, omdat het de groei van Gram-positieve micro-organismen die in het monster aanwezig kunnen zijn, remt..

Evenzo werken dikaliumfosfaat en monokaliumfosfaat als een pH-balanceersysteem. Dit systeem is noodzakelijk, omdat de lactose in de bouillon de neiging heeft om het medium aan te zuren wanneer het door micro-organismen wordt gefermenteerd, maar dit wordt gecompenseerd door fosfaatzouten.

Daarom zijn deze elementen essentieel, omdat de ongecontroleerde zuurgraad van invloed kan zijn op de juiste ontwikkeling van de gezochte micro-organismen.

Van zijn kant stabiliseert natriumchloride het medium osmotisch, terwijl water het oplosmiddel is van de aanwezige opgeloste stoffen en verschaft het de vloeibare consistentie aan het medium.

EC-bouillon gemodificeerd met novobiocine

Okrend en Rose creëerden een verscheidenheid aan EC-bouillon, EC-bouillon genaamd gemodificeerd met novobiocine. De modificatie bestond uit de vermindering van de concentratie van galzouten en de toevoeging van 20 mg / dl novobiocine.

Deze wijziging bevordert het herstel van stammen van Escherichia coli enterohemorragisch (O157: H7).

Dit bacteriële serotype veroorzaakt ernstige hemorragische colitis die hemolytisch-uremisch syndroom (HUS) kan veroorzaken; wat op zijn beurt een acuut nierfalen kan veroorzaken, met een hoog sterftecijfer dat bij ouderen tot 50% kan oplopen.

Vanwege de morbiditeit en mortaliteit die jaarlijks door deze bacterie wordt veroorzaakt als gevolg van de consumptie van besmet voedsel, beveelt het Amerikaanse ministerie van Landbouw (USDA) in brede kring het gebruik van deze middelen aan..

voorbereiding

EC Bouillon

Weeg 37,4 gram van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Laat het mengsel 5 minuten rusten. Vervolgens lost het oplossen in een warmtebron vaak op.

Eenmaal opgelost, wordt het verdeeld in reageerbuizen die eerder zijn geconditioneerd met een Durham-buis aan de binnenkant. Steriliseer in een autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C.

De pH van het medium moet 6,9 ± 0,2 zijn. De kleur van het gedehydrateerde medium is beige en bereid is licht barnsteen.

De wijnen worden bewaard in een koelkast tot ze worden gebruikt. Op het moment van gebruik moeten de bouillons op kamertemperatuur zijn.

Aan de andere kant kan de EC-bouillon ook in dubbele concentratie worden bereid.

EC-bouillon gemodificeerd met novobiocine

Weeg 36,7 gr van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter water. De rest van het preparaat is hetzelfde als hierboven beschreven.

gebruik

Analyse van totale en fecale coliformen

De EC-bouillon is ideaal voor de bevestigende fase van de studie van coliformen volgens de NMP-methode, zowel in watermonsters als in farmaceutische producten en voedsel.

Luie, troebele en gasproducerende bouillons verkregen in de veronderstelde fase moeten worden opnieuw ingezaaid in 2% heldere groene gal en EG-bouillon.

Voor totale coliformen worden de EC-bouillons gedurende 24 tot 48 uur bij 37 ° C in aerobio's geïncubeerd, en voor fecale coliformen worden ze gedurende 24 tot 48 uur bij 44 ° C in aerobio's geïncubeerd.

In beide gevallen wordt het op de volgende manier geïnterpreteerd: de troebele buizen met gasproductie worden als positief beschouwd. Als er binnen 24 uur geen gasproductie is, wordt de incubatie gedurende maximaal 48 uur voortgezet.

De positieve bouillons van de EC gaan over naar de volledige bevestigingsfase, die bestaat uit opnieuw uitzaaien in selectieve media zoals Mac Conkey agar, EMB agar of Endo agar..

Als de gebruikte bouillon EG-gemodificeerd is met novobiocine, worden de positieve slangen aanbevolen om te reseeden op Mac Conkey agar met sorbitol.

Kwaliteitscontrole

Kwaliteitscontrole moet worden uitgevoerd op elke partij bereid medium. Ten eerste moet de steriliteit van het medium worden geëvalueerd. In deze zin worden één of twee bouillons geïncubeerd zonder inoculatie in aerobiose gedurende 24 uur bij 37 ° C. Het verwachte resultaat is een transparante bouillon, zonder troebelheid of kleurverandering.

Ten tweede moet de groei van bekende stammen worden beoordeeld, waarvoor de volgende bacteriën kunnen worden gebruikt: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

In alle gevallen wordt een bevredigende microbiële ontwikkeling verwacht, waarbij een troebele bouillon met gasproductie wordt waargenomen E. coli en zonder gas voor Salmonella.

Andere stammen die kunnen worden opgenomen in de controle zijn: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Deze stammen moeten volledig worden geremd.

aanbevelingen

-De plaatsing van Durham-buizen is essentieel voor de studie van coliformen.

-Verdeel het medium in de reageerbuisjes vóór het steriliseren, nooit daarna.

-Niet gebruiken als het medium meer dan 3 maanden voorbereiding heeft.

-Niet gebruiken als de gebruikelijke kenmerken van het medium veranderen.

referenties

1. Laboratoria Britania. EC Medium. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
2. E. coli enterohemorragische. Het Centrum voor voedselveiligheid en volksgezondheid. 2010. Beschikbaar op: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Gemiddeld EC. Beschikbaar bij: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Medium EC gemodificeerd met novobiocine. Beschikbaar bij: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Detectie, isolatie en karakterisering van Escherichia coli producent van Shiga-toxine uit vers gehakt rundvlees van slagerijen in Concepción, provincie Tucumán. Rev Microgol door Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Beschikbaar op: www.scielo.org.