Samenstelling lactosado bouillon, bereiding en toepassingen



de lactose bouillon is een vloeibaar, niet-selectief kweekmedium, hoofdzakelijk gebruikt als een voorrijkingsmedium bij de isolatie van Salmonella-stammen van microbiologische analyse uitgevoerd op bewerkte voedingsmiddelen, zuivelproducten of water. Dit wordt aanbevolen door de International Commission on Microbiological Specifications for Foods (ICMPF).

Het medium bevat enzymatische vertering van gelatine, vleesextract en lactose, stoffen die nodig zijn voor de groei van bacteriën. Bovendien is lactose een fermenteerbaar koolhydraat, dus sommige coliformen kunnen het splitsen met gasproductie.

Daarom wordt de lactose bouillon wordt aanbevolen door de American Public Health Association (APHA) voor de vermoedelijke studie van totale en fecale colibacteriën, noemde het een uitstekend alternatief voor lauryl bouillon sulfaat vervangen tryptose- de standaardtechniek meest waarschijnlijke aantal (NMP ) voor de microbiologische analyse van voedselsteekproeven, melk en oppervlaktewater, grondwater, recreatiewater, huishoudelijk afvalwater en industrieel.

index

  • 1 Foundation
  • 2 Voorbereiding
  • 3 Gebruik
    • 3.1 Pre-verrijking
    • 3.2 Analyse van totale en fecale coliformen
  • 4 Kwaliteitscontrole van het medium
  • 5 Referenties

stichting

Voor de microbiologische analyse van sommige monsters is de stap van voorverrijking van essentieel belang om een ​​specifiek micro-organisme dat in een zeer kleine hoeveelheid kan zijn of onder ongunstige omstandigheden die de levensvatbaarheid schenden of minimaliseren, te kunnen terugwinnen..

Dat is het geval van droge en bewerkte voedingsmiddelen, mogelijk besmet met Salmonellas sp. In deze gevallen, als de bacteriën aanwezig zijn, hebben ze te lijden gehad van fysieke en chemische mishandeling tijdens het productieproces van het product..

Zodanig dat de micro-organismen blootgesteld aan ongunstige factoren zoals uitdroging, blootstelling aan remmende of toxische producten en overlapping opgewekt door de aanwezigheid van andere bacteriën in grotere hoeveelheid, oa.

In deze zin heeft de lactosevloeistof een herstellend effect op de beschadigde structuren van het micro-organisme, waardoor het herstelt en zich vermenigvuldigt, op een zodanige manier dat het kan worden gedetecteerd.

Evenzo heeft de lactosebouillon het vermogen om de remmende stoffen te verdunnen die de levensvatbaarheid ervan kunnen beïnvloeden, waardoor de ontwikkeling ervan mogelijk wordt. Bovendien is de voedingssamenstelling van de lactosevloeistof strategisch om de groei van te begunstigen Salmonella sp boven andere micro-organismen.

Voor de definitieve identificatie moet het worden geteeld in de richting van andere middelen van definitieve gewassen.

Aan de andere kant maakt de samenstelling van het medium ook het detecteren van lactose fermenterende micro-organismen die gas produceren mogelijk.

voorbereiding

Bereid om 1 liter lactosemon te bereiden 13 gram van het gedehydrateerde medium en los op in 1000 ml gedestilleerd water.

Om het medium in het water op te lossen, kunt u de oplossing een beetje verwarmen, maar niet te veel..

Zodra homogene oplossing wordt als volgt bereid: Als de bouillon wordt gebruikt om naar coliformen, een rek met reageerbuizen, die wordt ingebracht in een fermentatie buis Durham bereidt mond beneden.

De Durham-buis is een zeer belangrijk detail, omdat het de gasvorming, waardevolle gegevens bij het zoeken naar coliformen zal detecteren..

Wanneer de buizen klaar zijn, wordt er 10 ml lactosemonoblok in verdeeld, wat voldoende moet zijn om de hele Durham-buis te bedekken..

Als de lactosebouillon wordt gebruikt als een voorverrijkingsbouillon, is het niet nodig om een ​​Durham-gistingsbuis te plaatsen. In dit geval is een grotere hoeveelheid medium (225 ml) nodig, die wordt geserveerd in flessen van 500 ml, een brede mond en met een thermohardende schroefdop.

Vervolgens worden de buizen of flessen gedurende 15 minuten bij 121 ° C naar de autoclaaf gevoerd.

Het medium moet op een uiteindelijke pH van 6,9 ± 0,2 bij 25 ° C blijven.

De wijnen worden bewaard in een koelkast tot ze worden gebruikt.

Voor gebruik moeten de bouillon worden aangemaakt op kamertemperatuur.

Aan de andere kant kan de lactosebouillon ook in dubbele concentratie worden bereid.

Sommige laboratoria voegen broomcresol paars toe aan de lactosebouillon als pH-indicator om de buizen te tonen waar lactosefermentatie door de kleurverandering heeft plaatsgevonden. In dit geval heeft de bouillon een paarse kleur en als de gisting geel wordt.

toepassingen

In microbiologielaboratoria wordt lactosedebouillon veel gebruikt als een relatief goedkoop medium dat betrouwbare en snelle resultaten biedt (24-48 uur).

Het kan worden gebruikt voor de analyse van totale en fecale coliformen in water en voedsel of als een voorverrijkingsbouillon voor Salmonella..

Preenrichment

Pre-verrijking is een stap voorafgaand aan de verrijking van het monster, wat het herstel van bacteriën van het geslacht Salmonella in bewerkte voedingsmiddelen sterk verbetert..

Om dit te doen, wordt het monster van het vaste voedsel (25 gram) of vloeistof (25 ml) geënt in 225 ml lactosebeslag en gedurende 24 tot 48 uur geïncubeerd. Vervolgens zal selenietcystinebouillon of tetrathionaatkweek worden gesubkweekt in een verrijkt medium. Daarna gaat het over op selectieve media XLD en SS.

Analyse van totale en fecale coliformen

Het is een uitstekend middel als een indicator van fecale besmetting.

Daarom is de lactosebouillon ideaal voor de vermoedelijke fase van het coliforme onderzoek volgens de methode met het meest waarschijnlijke aantal.

Voor monsters die grote aantallen coliformen wordt vermoed kleinere hoeveelheid daarvan (1 ml) werd geënt, terwijl bij monsters die minder coliformen meer verdachte monstervolume (10 ml) wordt geïnoculeerd.

10 verdunningen zijn gemaakt voor de analyse-1, 10-2, 10-3, het vormen van een batterij met 3-5 buizen voor elke gebruikte concentratie.

Van elke verdunning wordt hetzelfde volume gezaaid voor de lactosevloeistoffen.

De buizen worden 24 uur geïncubeerd. De bouillons die negatief zijn, worden nog 24 uur geïncubeerd.

De interpretatie van de resultaten gebeurt door twee kenmerken te observeren: de eerste is de aanwezigheid of afwezigheid van troebelheid en aangezien dit medium geen pH-indicator bevat, zal er geen verandering in kleur optreden.

De tweede is de productie of niet van gas. Het gas wordt gemakkelijk gedemonstreerd in de Durham-buis, door het verschijnen van een of meer luchtbellen binnenin.

Het wordt als positief beschouwd als beide kenmerken worden waargenomen, dat wil zeggen troebelheid bij gasproductie. Positieve tubes moeten opnieuw worden gezaaid in bevestigingsmedia (bouillon Brilliant Green 2% Bile en EC-bouillon).

Kwaliteitscontrole van het medium

- Bij de bereiding van het medium is het belangrijk om niet te vergeten de Durham-buizen te plaatsen als hetzelfde doel het bestuderen van coliformen is..

- Verwarm het medium niet voordat u gaat steriliseren.

- Verdeel in reageerbuizen vóór het steriliseren, nooit daarna.

- Niet gebruiken als het medium meer dan 3 maanden voorbereiding heeft.

- Gebruik het niet als u enige verandering in de gebruikelijke kenmerken van het medium opmerkt.

- Bij het bereiden van een partij lactosevloeistof, test de kwaliteit ervan door het planten van stammen die bekend staan ​​als Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii en Klebsiella pneumoniae. Ze groeien heel goed, met gasproductie (positieve controle).

- Het kan ook bevatten Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium of Enterococcus faecalis, die goed groeien, maar zonder gasproductie (negatieve controle).

- Opgemerkt moet worden dat de oorspronkelijke kleur van het gedehydrateerde medium beige is en dat van het medium zeer helder en transparant geel is bereid. Als de kleur of het uiterlijk verandert, kan dit hetzelfde zijn.

referenties

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologie en microbiologie van het milieu. (2013) 1e editie. Universiteit van Cartagenas, Colombia.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B en Velázquez O. (2009). Technieken voor de microbiologische analyse van voedsel. 2e druk. Faculteit der Scheikunde, UNAM. Mexico.
  3. Laboratoria Conda Pronadisa. 2017. Lactose bouillon dubbele concentratie (Europese Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Vergelijking van technieken voor de extractie van coliforme bacteriën uit het meersediment van Xochimilco, Mexico. Rev. argent. Microbiol.  2013; 45 (3): 180-184. Beschikbaar op: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Bepaling van de microbiologische kwaliteit van de artesische bronwateren van de districten van de gemeentelijke departementen Central, Cordillera en Capital. Mem. Inst. Onderzoek. Cienc. gezondheid 2013; 11 (1): 5-14. Beschikbaar vanaf: scielo.iics.