Selenietkweekfundering, bereiding en toepassingen

de seleniet bouillon Het is een selectief vloeibaar kweekmedium. Het werd ontworpen door Leifson voor de verrijking van monsters waarbij de aanwezigheid van enteropathogene bacteriën van het geslacht Salmonella wordt vermoed..

Dit medium voldoet aan de eisen van de American Public Health Association (APHA) en wordt daarom geaccepteerd voor onderzoek naar de aanwezigheid van Salmonella in ontlastingmonsters, urine, vloeibaar of vast voedsel, water, onder andere..

De chemische samenstelling die het bezit begunstigt het herstel van deze micro-organismen en remt op zijn beurt de groei van anderen. Het is vooral giftig voor de meeste bacteriën die tot de familie Enterobacteriaceae behoren. Het laat echter ook het herstel van stammen van Shigella toe en remt de groei van Pseudomonas en Proteus niet..

Het is samengesteld uit watervrij natriumwaterstofseleniet, watervrij natriumfosfaat, peptonen en lactose. Er is ook een variant waaraan cystine wordt toegevoegd, vandaar de naam seleniet-cystinebouillon.

Momenteel is het gebruik van Seleniet cystine bouillon de voorkeur, omdat hogere percentage herstel gelijk aan die waargenomen met andere selectieve media voor hetzelfde doel Salmonella, zoals natriumtetrathionaat bouillon verkregen.

index

• 1 Foundation
• 2 Voorbereiding
  • 2.1 - Selena
  • 2.2 -Voorbereiding van het commerciële medium
  • 2.3 Variant seleniet-cystinebouillon
• 3 Gebruik
• 4 gezaaid
• 5 kwaliteitscontrole
• 6 Beperkingen
• 7 Referenties

stichting

De peptonen in de bouillon dienen als voedingsstoffen voor de juiste ontwikkeling van micro-organismen. Salmonella-stammen gebruiken peptonen als een bron van stikstof, vitamines en aminozuren.

Lactose is fermenteerbaar koolhydraat, terwijl natriumseleniet is de remmer die de groei van Gram-positieve bacteriën en de meeste bacteriën in de darmflora vertraagt, met name van de familie Enterobacteriaceae. Natriumfosfaat is de buffer die de pH van het medium stabiliseert.

In het geval van de variant van selenietvloeistof die L-cystine bevat, is deze extra verbinding een reductiemiddel dat de toxiciteit van seleniet minimaliseert, waardoor het herstel van Salmonella wordt verhoogd.

voorbereiding

-Seleniet bouillon

Als je de componenten van het mengsel hebt, kun je wegen:

4 g watervrij natriumwaterstofseleniet.

10 g watervrij natriumfosfaat.

5 gr peptonas.

4 g lactose.

Los de verbindingen op in 1 liter steriel gedestilleerd water. Het kan enigszins worden verwarmd om het in zijn geheel op te lossen.

Sommige laboratoria stellen het medium 10 minuten bloot in vloeiende stoom om het te steriliseren, omdat de autoclaaf niet moet worden gebruikt. Als het medium wordt gesteriliseerd, kan het in de koelkast worden bewaard totdat het wordt gebruikt.

Het kan ook worden bereid zonder sterilisatie en directe toediening van 10 tot 15 ml aan de steriele reageerbuizen.

In dit geval moet het worden gelaten om te rusten en onmiddellijk worden gebruikt. Omdat het medium niet steriel is, kan het niet in een koelkast worden bewaard voor later gebruik.

-Voorbereiding van het commerciële medium

Als het commerciële medium beschikbaar is, wordt 23 g van het gedehydrateerde medium afgewogen en opgelost in één liter steriel gedestilleerd water. Warm even om het oplossen te voltooien. Niet steriliseren in een autoclaaf. Dien aseptisch 10 of 15 ml in steriele reageerbuizen.

De uiteindelijke pH van het medium moet 7,0 ± 0,2 zijn.

Opgemerkt moet worden dat de kleur van het gedehydrateerde medium beige is en de bereiding helder en doorschijnend barnsteen is.

Variant seleniet-cystinebouillon

Het bevat dezelfde verbindingen van de selenietvloeistof, maar er wordt 10 mg cystine toegevoegd. De rest van de procedure is precies hetzelfde als hierboven beschreven.

toepassingen

Dit medium is speciaal voor gebruik in epidemiologische studies, in gevallen waarin de ziekte niet in zijn acute fase is, asymptomatische patiënten of gezonde dragers.

De isolatie van het geslacht Salmonella is meestal moeilijk, omdat meestal wordt vastgesteld dat ze de monsters op een schaarsere manier besmetten. Het in kleine hoeveelheden zijn wordt gemakkelijk overlapt door de groei van andere bacteriële geslachten die in grotere hoeveelheden worden aangetroffen.

Aan de andere kant wordt de grondstof waarmee verwerkt voedsel wordt verwerkt vaak blootgesteld aan hitte, aan dehydratatieprocessen, aan het gebruik van onder meer ontsmettingsmiddelen, straling en conserveringsmiddelen..

Daarom worden de Salmonella's die in de grondstof aanwezig zijn, mishandeld door het product aan de bovengenoemde industriële processen te onderwerpen. Evenzo, in het geval van klinische monsters zoals uitwerpselen, kunnen de stammen zwak zijn als ze afkomstig zijn van patiënten die met antibiotica zijn behandeld..

Bijgevolg moet elk monster waarin de aanwezigheid van Salmonella vermoedelijk vooraf worden verrijkt in lactose bouillon en vervolgens verrijkt met seleniet herstel optimaliseren selectief, zoals SS agar-agar media xylose, lysine deoxycholaat (XLD ), enterische Hektoen-agar (HE) en groen-heldere agar, onder anderen.

geplant

Neem voor monsters ontlasting 1 g monster en suspendeer in een buisje met 10 tot 15 ml selenietvloeistof. Als de ontlasting vloeibaar is, neem dan 1 ml en suspendeer in de bouillon. Voor rectale swabs, giet het wattenstaafmateriaal in de bouillon.

Neem in monsters van vast voedsel 1 g en suspendeer in de selenietvloeistof.

In vloeibaar voedsel meng in gelijke delen met de selenietvloeistof bij dubbele concentratie.

Voor urinemonsters centrifugeer, gooi het supernatant weg, neem al het sediment en suspendeer het in de selenietvloeistof.

De bouillons worden geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 24 uur incubatie. Bacteriegroei wordt bewezen door troebelheid. Een extra buis per monster kan ook worden opgenomen om te incuberen bij 42 ° C. Zaai vervolgens selectieve vaste media uit de selenietvloeistof.

Kwaliteitscontrole

Om de steriliteit te regelen, wordt een selenietvloeistof uit elke batch zonder inoculatie 24 uur bij 37 ° C geïncubeerd. Er wordt verwacht dat er geen troebelheid of kleurverandering van het medium is.

Om de goede werking van het medium te regelen, kunnen bekende stammen worden gebruikt, zoals:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 en Proteus mirabilis ATCC 43071.

De verwachte resultaten zijn:

• Voor de eerste drie bacteriestammen moet de groei bevredigend zijn.
• naar Escherichia coli gedeeltelijke remming.
• Voor Proteus matige groei.

beperkingen

De medium selenietvloeistof is giftig voor de menselijke huid, daarom moet direct contact worden vermeden.

referenties

1. Flores-Abuxapqui J pUC-Franco M, Heredia Navarrete-M, woon-Rosel M Franco-Monsreal J. Vergelijking kweekmedia natriumseleniet en natriumtetrathionaat, geïncubeerd bij zowel 37 ° C en 42 ° C gedurende het isolement van Salmonella ontlasting van dragers van dragers. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
2. Laboratoria Britania. Selenito Caldo. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Selenito-bouillon Beschikbaar bij: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Valela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Microbiologische isolatie van Salmonella spp. en moleculaire hulpmiddelen voor detectie. Gezondheid, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Beschikbaar vanaf: http://www.scielo.org.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.