Sojabouillon tripticaseína foundation, bereiding en toepassingen

de soja bouillon tripticaseína Het is een vloeibaar kweekmedium, zeer voedzaam en niet-selectief. Vanwege de grote veelzijdigheid is het een van de meest gebruikte vloeibare kweekmedia in het microbiologisch laboratorium.

Het is ook bekend als bouillon tripticasa-soja of gedigereerde caseïne-soja, waarvan de afkorting TSB is voor het acroniem in het Engels Tryptisch ben ik Broth of CST voor zijn afkorting in het Spaans. Het gebruik ervan is zeer gevarieerd vanwege de samenstelling. Het is samengesteld uit tripteïne, sojapepton, natriumchloride, dikaliumfosfaat en glucose.

Het is in staat om klinisch belangrijke pathogene bacteriën te reproduceren, inclusief die welke qua voedingswaarde veeleisend zijn en anaerobe bacteriën. Sommige opportunistische schimmels en verontreinigingen kunnen zich ook in deze omgeving ontwikkelen.

Vanwege zijn hoge voedingsvermogen heeft het een hoge gevoeligheid voor het detecteren van microbiële contaminatie, daarom werd het door de USDA-inspectie voor dier- en plantgezondheid geselecteerd voor de microbiologische analyse van vaccins..

Evenzo voldoet de tripticase-sojasoep aan de eisen van de verschillende farmacopeeën (Europese EP, Japanse JP en Noord-Amerikaanse USP) voor de microbiologische studie van producten op industrieel niveau, zoals cosmetica en voedsel.

Anderzijds is het vermeldenswaard dat dit medium ondanks zijn grote bruikbaarheid relatief goedkoop is, dus het is betaalbaar voor de meeste microbiologische laboratoria. Het is ook heel gemakkelijk om voor te bereiden.

index

• 1 Foundation
• 2 Voorbereiding
  • 2.1 Trypticamine-soja
  • 2.2-Varianten van tripticaseine sojabouillon
• 3 Gebruik
• 4 gezaaid
• 5 kwaliteitscontrole
• 6 Beperkingen
• 7 Referenties

stichting

De tripteína, het pepton en de glucose verschaffen hem de essentiële voedzame eigenschappen om het in een ideaal medium te veranderen voor een snelle microbiële ontwikkeling.

Ongeveer 6 tot 8 uur incubatie is al groei in de meeste micro-organismen te zien. Er zijn echter langzaam groeiende soorten die dagen kunnen blijven groeien.

Natriumchloride en dikaliumfosfaat werken respectievelijk als osmotisch evenwicht en pH-regulator. De aanwezigheid van groei wordt bewezen door het verschijnen van troebelheid in het medium; als er geen groei is, blijft het medium doorschijnend.

Door zijn lichte kleur is het mogelijk om de productie van pigmenten te observeren, zoals die weergegeven in de afbeelding aan het begin van het artikel, die overeenkomt met het pigment geproduceerd door Pseudomonas aeruginosa. 

voorbereiding

-Tryptische sojabonen bouillon

Bereid om de tripticase-sojabouillon te bereiden 30 gram van het gedehydrateerde commerciële medium op een digitale schaal. Vervolgens lost het op in een liter gedestilleerd water in een fiola.

Het mengsel laat men 5 minuten staan ​​en wordt vervolgens naar een warmtebron gebracht om te helpen bij het oplossen van het medium. Het moet vaak worden geschud tijdens het koken gedurende 1 minuut.

Eenmaal opgelost, wordt het naar behoefte verdeeld in tubes van de juiste grootte. Er kunnen tubes met een wattenschijfje of bakelieten doppen worden gebruikt. Vervolgens worden de buizen gesteriliseerd met het medium in de autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C.

De pH van het medium moet 7,3 ± 0,2 zijn

Er moet rekening worden gehouden met het feit dat de kleur van het gedehydrateerde kweekmedium lichtbeige is en moet worden bewaard bij 10 tot 35 ° C, op een droge plaats. Terwijl de bereide bouillon licht barnsteen is en bewaard moet worden in de koelkast (2 tot 8 ° C).

-Variaties van tripticaseine sojabouillon

Trypticamine gemodificeerde sojabouillon kan worden bereid door galzouten en novobiocine toe te voegen om het selectief te maken voor de isolatie van E. coli. Een andere optie voor hetzelfde doel is om tripticase-sojabouillon te bereiden aangevuld met vancomycine, cefixime en telluriet (2,5 μg / ml).

Aan de andere kant kan meer glucose (0,25%) worden toegevoegd aan trypticaseine sojabouillon wanneer het doel is biofilmvorming te stimuleren..

gebruik

Het is voedzaam genoeg om de groei van veeleisende of vervelende bacteriën zoals Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp en Brucella sp, niet nodig om aan te vullen met bloed of serum.

Evenzo kunnen sommige schimmels zich ontwikkelen in deze bouillon, zoals Candida albicans complex, Aspergillus sp en Histoplasma capsulatum.

Bovendien is dit medium onder anaerobe omstandigheden ideaal voor het terugwinnen van bacteriën die behoren tot het Clostridium-genus, evenals anaërobe niet-gesporuleerde bacteriën van klinisch belang..

Indien toegevoegd kan 6,5% natriumchloride worden gebruikt voor de groei van Enterococcus en andere Groep D Streptococcus.

Op onderzoeksniveau was het zeer nuttig in verschillende protocollen, vooral in de studie van bacteriën die biofilms of biofilms vormen. Het wordt ook gebruikt om de bacteriële suspensie voor te bereiden op 0,5% van de Mac Farland die nodig is om het antibiogram uit te voeren volgens de methode van Kirby en Bauer.

In dit geval worden 3 tot 5 kolonies van vergelijkbaar uiterlijk genomen en geëmulgeerd in 4-5 ml trypticaseine sojabouillon. Het wordt vervolgens gedurende 2 tot 6 uur bij 35-37 ° C geïncubeerd en vervolgens met de steriele zoutoplossing op de gewenste concentratie ingesteld. Trypticase sojabouillons mogen niet worden gebruikt gedurende 18 tot 24 uur incubatie.

geplant

Het monster kan direct worden gezaaid of in subgekweekte zuivere kolonies worden genomen van selectieve media. Het inoculum moet klein zijn om het medium niet vóór incuberen te vertroebelen.

Normaal incuberen gedurende 24 uur bij 37 ° C in aerobiose, maar deze omstandigheden kunnen variëren afhankelijk van het micro-organisme dat wordt gezocht. Het kan ook worden geïncubeerd in anaërobe omstandigheden bij 37 ° C gedurende meerdere dagen indien nodig. Bijvoorbeeld, in veeleisende of langzaam groeiende micro-organismen kunnen tot 7 dagen worden geïncubeerd.

In de microbiologische analyse van farmaceutische stoffen - zoals vaccins - zijn de protocollen strenger. In deze gevallen wordt het beslag zonder groei niet weggegooid tot het 14 dagen van continue incubatie bereikt.

Kwaliteitscontrole

Voor elke bereide batch moeten 1 of 2 tubes worden geïncubeerd zonder inoculatie om de steriliteit aan te tonen. Het moet ongewijzigd blijven.

Je kunt ook bekende stammen planten om hun gedrag te evalueren. Onder de soorten die kunnen worden gebruikt zijn:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 of 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

In alle gevallen moet de groei bevredigend zijn onder de omstandigheden van atmosfeer en temperatuur die geschikt zijn voor elk micro-organisme.

beperkingen

-De fermentatie van glucose veroorzaakt de afname van de pH van het medium door de productie van zuren. Dit kan ongunstig zijn voor het overleven van sommige micro-organismen die gevoelig zijn voor zuren.

-Het wordt niet aanbevolen voor het onderhoud van stammen, omdat naast de zuurgraad, de bacteriën na een paar dagen de voedingsstoffen afbreken met de daaruit voortvloeiende opeenhoping van giftige stoffen die de omgeving onherbergzaam maken.

-Bij de behandeling van alle steriliteitsprotocollen moet voorzichtigheid worden betracht, omdat de bouillons gemakkelijk vervuild kunnen raken.

-Probeer na de bereiding van tripticaseine sojabouillons geen bouillon over te brengen naar een andere steriele buis, omdat dit soort manoeuvres zeer kwetsbaar is voor contaminatie.

referenties

1. Cona E. Voorwaarden voor een goede gevoeligheidsstudie met behulp van een agar-diffusietest. Chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Beschikbaar op: scielo.org
2. British Laboratory Tryteïne sojabouillon. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
3. MCD Laboratorium. Trytica sojabouillon. Beschikbaar bij: electronic-systems.com
4. Neogen-laboratorium. Soy Broth Triptych. Beschikbaar bij: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Evaluatie van de techniek van magnetische immunoseparatie voor herstel van Escherichia coli O157: H7 in melkcrèmes. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Beschikbaar op: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilmvorming in geïsoleerde Staphylococcus aureus volgens antimicrobiële gevoeligheid en klinische herkomst. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Beschikbaar bij: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolatie van Escherichia coli O157: H7 in ontlasting Monsters van rundervee voor dubbel gebruik van de gemeente Miranda, Zulia State, Venezuela. Rev Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Beschikbaar op: scielo.org