Tetrathionate bouillon foundation, bereiding en toepassingen

de tetrationate bouillon of TT-bouillon is een selectief vloeibaar kweekmedium voor de verrijking en winning van Salmonella-stammen. Het is gemaakt door Müeller en later aangepast door Kauffmann. Om die reden zijn er mensen die het Müeller-Kauffmann-bouillon noemen.

Het oorspronkelijke medium bevatte proteosepeptonen, calciumcarbonaat en natriumthiosulfaat. Kauffmann voegde galzouten toe en creëerde een andere modaliteit met fel groen. Deze stoffen remmen de groei van coliformen en laten het vrije medium achter voor de ontwikkeling van pathogene bacteriën, in dit geval Salmonella.

De wijziging was zeer succesvol omdat het de gevoeligheid van het medium aanzienlijk verhoogde. Daarom is het momenteel nuttig voor het zoeken naar salmonella's in elk type monster, maar vooral voor vaste of vloeibare ontlasting en voedsel..

De voorbereiding bestaat uit twee fasen; het commerciële medium is een basis voor het bereiden van de tetrathionaatvloeistof en vervolgens voor het vormen van het tetrathionaat, wordt een gejodeerde jodiumoplossing toegevoegd om het medium te completeren.

De American Public Health Association (APHA) adviseert het gebruik van tetrathionaat bouillon dat is aangevuld met heldere voor de verrijking van Salmonella monsters voor groen als het meer selectief zijn dan het Tetrathionaat en seleniet.

In het algemeen is het Tetrathionaat is ideaal wanneer de aanwezigheid van Salmonella bacteriën in kleine hoeveelheden wordt vermoed of mishandeld door blootstelling aan remmers of industriële processen die hun levensvatbaarheid te minimaliseren.

index

• 1 Foundation
• 2 Voorbereiding
  • 2.1 - Tetrathionaat
  • 2.2-Variante tetrathionate bouillon met helder groen
• 3 Gebruik
• 4 Kwaliteitscontrole
• 5 Aanbevelingen
• 6 Referenties

stichting

De huidige peptonen corresponderen met caseïne pancreasdistests en peptische digestie van dierlijk weefsel. Deze bieden de bron van koolstof, stikstof en voedingsstoffen in het algemeen voor bacteriegroei.

Op zijn beurt reageert natriumthiosulfaat met de gejodeerde oplossing om tetrathionaat te vormen. Dit remt de groei van coliformen en bevordert de ontwikkeling van bacteriën die het enzym reductase tetrathionaat, waaronder het genus Salmonella is, maar ook Proteus.

Galzouten werken ook als een remmende stof van de meeste Gram-positieve bacteriën en sommige Gram-negatieve bacteriën (coliformen).

Calciumcarbonaat absorbeert de giftige stoffen die worden gevormd door de afbraak van tetrathionaat, dat zwavelzuur vormt. In deze zin neutraliseert calciumcarbonaat de zuurgraad waarbij de pH van het stabiele medium wordt gehandhaafd.

In het geval van de heldergroene modaliteit verhoogt deze substantie het selectieve vermogen van de tetrathionaatvloeistof door andere micro-organismen dan het geslacht Salmonella te remmen..

voorbereiding

-Tetrationate bouillon

Jodiumoplossing van jodium

Spijt:

• 6 g jodium.
• 5 g kaliumjodide.

Het kaliumjodide wordt opgelost in ongeveer 5 ml steriel gedistilleerd water, en vervolgens wordt het jodium beetje bij beetje toegevoegd terwijl het mengsel wordt verwarmd. Nadat het volledig is opgelost, wordt het gevuld met steriel gedestilleerd water totdat het een eindvolume van 20 ml bereikt.

Halve basis voor tetrathionate bouillon

Weeg 46 gram van het gedehydrateerde medium af en suspendeer in 1 liter steriel gedestilleerd water. Mix en verwarm tot het volledig is opgelost, het kan slechts een paar minuten koken. Niet steriliseren in een autoclaaf. De base van het medium laat men afkoelen tot ongeveer 45 ° C en op dat moment wordt 20 ml van de gejodeerde oplossing toegevoegd..

Na het toevoegen van de oplossing moet jodurada onmiddellijk worden gebruikt. Als u niet het hele mengsel wilt gebruiken, gaat u als volgt te werk:

10 ml van het basismedium wordt verdeeld in buizen en slechts 0,2 ml van de gejodeerde oplossing wordt toegevoegd aan die welke worden geïnoculeerd met monsters..

Degenen die niet zullen worden gebruikt, kunnen nog steeds in de koelkast worden bewaard. Omdat het medium niet wordt gesteriliseerd, is het ideaal om precies de benodigde hoeveelheid voor te bereiden..

De kleur van het medium voordat de jodiumhoudende joodoplossing wordt toegevoegd, is melkachtig wit met witte neerslag en na toevoeging is het bruin met een dicht neerslag. Het waargenomen precipitaat is normaal en komt overeen met calciumcarbonaat dat niet oplost. De uiteindelijke pH van het medium is 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionate bouillon-variant met felgroen

Om de tetrathionaatbouillon met felgroen te bereiden, worden alle hierboven beschreven stappen uitgevoerd, maar bovendien wordt aan het mengsel 10 ml van de heldergroene oplossing, bereid met 0,1%, toegevoegd..

Helder groen

Deze oplossing is als volgt samengesteld:

Weeg 0,1 g helder groen en suspendeer in 100 ml gedestilleerd water. Verwarm tot het kookpunt om het volledig op te lossen. Bewaar in amberkleurige fles.

gebruik

Voor ontlastingsmonsters (stoelgangcultuur) is het protocol als volgt:

Vaccineer 1 g vaste ontlasting of 1 ml vloeibare ontlasting in een buis met 10 ml kant-en-klaar tetrathionaat beslag. Schud krachtig en incubeer gedurende 6-24 uur in een aerobio bij 43 ° C.

Vervolgens werd een hoeveelheid van 10 tot 20 ul van het kweekmedium en verder gekweekt in een selectief medium voor Salmonella, zoals SS agar, XLD agar, brilliant groen agar, Hektoen enterische agar, etc..

Parallel daarmee moeten selectieve media voor Salmonella worden geënt met het directe monster (feces) zonder verrijking. Voor monsters van rectale swabs downloadt u het verzamelde materiaal in de tube en gaat u verder zoals hierboven beschreven.

Weeg voor voedselmonsters 10 g vast voedsel of 10 ml vloeibaar voedsel en ent een flesje met 100 ml kant-en-klare tetrathionaatvloeistof. Ga op dezelfde manier te werk als hierboven beschreven maar incubeer bij 37 ° C.

Zoals te zien is, zal de relatie tussen het monster en de bouillon altijd 1:10 zijn.

Kwaliteitscontrole

Voor het testen van het kweekmedium kunnen bekende controlestammen worden gebruikt. De meest gebruikte zijn ATCC-gecertificeerde stammen.

De te gebruiken stammen zijn Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 en Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Voor Salmonella-stammen wordt een uitstekende ontwikkeling verwacht, terwijl Escherichia coli kan een zwakke of regelmatige ontwikkeling hebben en Gram-positieve stammen (Enterococcus en Staphylococcus) zijn gedeeltelijk of volledig geremd.

aanbevelingen

-Aangezien dit medium de groei van Proteus niet remt, gebruiken sommige laboratoria 40 mg / l novobiocine om de ontwikkeling van deze microbiële stam te voorkomen. Het antibioticum moet vóór de gejodeerde jodiumoplossing worden toegevoegd.

-Na de bereiding van het medium, inclusief de jodiumhoudende jodiumoplossing, mag het niet meer dan 2 uur na de inoculatie zijn.

-Op het moment van verdeling van het medium in de buizen, moet het mengsel continu worden gehomogeniseerd om het gevormde precipitaat opnieuw te suspenderen.

-In minder verontreinigde monsters wordt de tetrathionaatvloeistof geïncubeerd bij 35-37 ° C en in sterk verontreinigde monsters wordt incubatie bij 43 ° C aanbevolen..

referenties

1. Conda Pronadisa-laboratorium. 2010. De tetrathionate bouillonbasis volgens Müeller-Kauffmann. Verkrijgbaar in:
2. BD Laboratories 2003. Tetrathionate Broth Base. Verkrijgbaar in:
3. Laboratoria Britania. 2015. Tethionate bouillonbasis. Verkrijgbaar in:
4. Media BBL. 2005. Tube-preparaten voor de teelt van de Salmonella-soort.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
6. Flores-Abuxapqui J pUC-Franco M, Heredia Navarrete-M, woon-Rosel M Franco-Monsreal J. Vergelijking kweekmedia natriumseleniet en natriumtetrathionaat, geïncubeerd bij zowel 37 ° C en 42 ° C gedurende het isolement van Salmonella spp van dragerkrukken. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220