Ureum bouillon foundation, bereiding en toepassingen

de ureum bouillon is een vloeibaar kweekmedium, gebruikt om de aanwezigheid van het enzym urease in bepaalde micro-organismen aan te tonen. Urease is een microbieel enzym dat constitutief wordt geproduceerd, dat wil zeggen, het wordt onafhankelijk van de vraag of het substraat waarop het werkt aanwezig is of niet.

De functie van urease is gerelateerd aan de afbraak van organische verbindingen. Niet alle micro-organismen zijn in staat om dit enzym te synthetiseren, daarom maakt de bepaling in het laboratorium het mogelijk om bepaalde bacteriële stammen te identificeren en zelfs te differentiëren tussen soorten van hetzelfde geslacht..

Er zijn twee soorten ureumtest: Stuart en Christensen. Ze verschillen in samenstelling en gevoeligheid. De eerste is speciaal om een ​​grote hoeveelheid urease te laten zien die geproduceerd is door soorten van het geslacht Proteus.

De tweede is gevoeliger en kunnen kleine hoeveelheden urease vertraging gegenereerd door andere bacteriën zoals Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, en Helicobacter genera Mycobacterium detecteren.

Stuart ureumbouillon is samengesteld uit ureum, natriumchloride, dikaliumfosfaat, monokaliumfosfaat, gistextract, fenolrood en gedistilleerd water.

Terwijl de bouillon of Christensen ureum agar bestaat uit pepton, natriumchloride, monokaliumfosfaat, glucose, ureum, fenolrood, gedestilleerd water en agar. Dit laatste alleen als het het vaste medium is.

index

• 1 Foundation
  • 1.1 Stuart ureumbouillon
  • 1.2 Christensen-bouillon of agar-ureum
  • 1.3 Interpretatie van beide media (Stuart en Christensen)
• 2 Voorbereiding
  • 2.1 Stuart ureumbouillon
  • 2.2 Christensen-bouillon of agar-ureum
• 3 Gebruik
• 4 De ureumtest zaaien
• 5 kwaliteitscontrole
• 6 Referenties

stichting

Het enzym urease hydrolyseert ureum om kooldioxide, water en twee moleculen ammoniak te vormen. Deze verbindingen reageren om het eindproduct genaamd ammoniumcarbonaat te vormen.

Stuart ureumbouillon

De Stuart-ureumvloeistof is meer gebufferd met een pH van 6,8. Daarom moet het micro-organisme grote hoeveelheden ammonium kunnen vormen om rood te worden in fenol. De pH moet boven de 8 stijgen.

Daarom ureum bouillon selectief Stuart Proteus, positieve resultaten oplevert in 24 tot 48 uur incubatie en is niet effectief voor bacteriën die lage hoeveelheden urease produceert of langzaam hydrolyseren ureum.

Dit komt omdat Proteus-soorten ureum als stikstofbron kunnen gebruiken. Daarentegen hebben andere urease-producerende bacteriën een extra bron nodig.

Pérez et al. (2002) vastgesteld dat het ureum bouillon Stuart was zo efficiënt als Christensen ureum agar aan urease in giststammen van de geslachten Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon en Saccharomyces bepalen.

De auteurs van de studie beweren dat ze voor 100% samenvallen met beide media (Stuart en Christensen) door 24 en 48 uur te incuberen; op voorwaarde dat ze de stammen die de media in een sterke roze-fuchsiakleurige kleur hebben omgezet, als positief beschouwden.

Deze verduidelijking is noodzakelijk, omdat Lodder (1970) bevestigde dat bijna alle gisten erin slagen om de schuine kant van ureum-agar van Christensen bleekroze te maken. Dit komt omdat ze ureum in minimale hoeveelheden kunnen hydrolyseren, en tot de vorming van amines door de oxidatieve decarboxylatie van de aminozuren op het oppervlak. Dit moet niet als positief worden geïnterpreteerd.

Bouillon of ureum-agar van Christensen

Christensen-ureumvloeistof of agar is minder gebufferd en kan kleine hoeveelheden ammonium detecteren. Bovendien is dit medium verrijkt met peptonen en glucose. Deze verbindingen veroorzaken dat andere urease-producerende micro-organismen die niet in de Stuart-bouillon groeien zich ontwikkelen.

Evenzo biedt de Christensen ureum-test snellere resultaten, vooral voor Proteus, die in slechts 30 minuten als minimumtijd en tot 6 uur als maximale tijd sterk positief kunnen zijn.

De rest van de urease-producerende micro-organismen te bereiken kleurhalf zetten iets na 6 uur, en sterk 24, 48, 72 uur of meer, en zelfs sommige stammen kunnen zwakke reacties geven bij 5 of 6 dagen.

Interpretatie van beide media (Stuart en Christensen)

Het medium is oorspronkelijk geeloranje van kleur en een positieve reactie zal de kleur van het medium in roze-fuchsia veranderen. De intensiteit van de kleur is rechtevenredig met de hoeveelheid geproduceerd ammonium.

Een negatieve reactie zal het medium van de originele kleur verlaten, behalve de gisten, die een lichtroze kleur kunnen geven met Christensen ureum agar.

voorbereiding

Stuart ureumbouillon

Weeg de nodige grammen volgens de aanwijzingen van het bedrijfshuis. Los op in bij voorkeur steriel gedestilleerd water. Gebruik geen warmte om op te lossen, omdat ureum gevoelig is voor warmte.

De membraanfiltratiemethode wordt gebruikt om te steriliseren. Hiervoor wordt een Millipore-filter met poriën met een diameter van 0,45 μ gebruikt. Gebruik geen autoclaaf. Zodra de oplossing is gefilterd, wordt deze verdeeld in steriele buizen. Om betrouwbare resultaten te verkrijgen, moet het worden overgedragen tussen 1,5 ml als minimale hoeveelheid tot 3 ml als maximale hoeveelheid per buisje..

Bewaar in een koelkast en temper vóór gebruik.

Als de filtratiemethode niet beschikbaar is, moet het medium onmiddellijk worden gebruikt om betrouwbare resultaten te verkrijgen.

Een andere manier om de ureum Stuart-bouillon te bereiden is als volgt:

Sommige commerciële huizen verkopen de halve basis voor de ureumtest, zonder ureum.

Het door de handelszaak aangegeven bedrag wordt gewogen. Het wordt opgelost in gedestilleerd water en 15 minuten gesteriliseerd in de autoclaaf bij 121 ° C. Laat het een beetje rusten en voeg, als het medium warm is, 100 ml van een oplossing van ureum toe, bereid met 20% en gesteriliseerd door filtratie.

Het wordt verdeeld in steriele buizen, zoals eerder beschreven.

Bouillon of ureum-agar van Christensen

-Bereiding van de ureumoplossing

Weeg 29 gram gedehydrateerd ureum af en los op in 100 ml gedestilleerd water. Gebruik de filtratiemethode om te steriliseren. Niet autoclaveren.

-Ureum base-agar

Los 24 g van de gedehydrateerde basisagar op in 950 ml gedestilleerd water. Steriliseer in de autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Laten staan ​​totdat het een temperatuur van 50 ° C bereikt en het eerder bereide ureum aseptisch toevoegen.

Giet 4 tot 5 ml in steriele kokers en kantel tot gestold. Er moet een lange fluitpiek zijn.

Dit medium kan ook in vloeibare vorm worden bereid.

toepassingen

De ureumtest is uiterst effectief in het onderscheiden van het geslacht Proteus van andere geslachten van de familie Enterobacteriaceae, gezien de snelle reactie van Proteus..

Als de samenstelling van Christensen wordt gebruikt, helpt de test om onderscheid te maken tussen soorten van hetzelfde geslacht. Bijvoorbeeld, S. haemolyticus en S. warneri sop Staphylococcus coagulase-negatief en betaholytisch, maar daar verschillen ze in S. haemolyticus het is negatief ureum en S. warneri het is positief ureum.

Aan de andere kant gebruikte McNulty met succes 2% Christensen-ureumbouillon om de aanwezigheid van te bestuderen Helicobacter pylori in monsters van biopsieën genomen uit het maagslijmvlies (antrale regio).

De aanwezigheid van H. pylori het wordt bewezen met een positieve ureumtest. De duur om de resultaten te observeren is rechtevenredig met de hoeveelheid micro-organismen die aanwezig is.

Zoals te zien is, is het een eenvoudige methode voor de diagnose van Helicobacter pylori in maagbiopten.

Ten slotte is deze test ook nuttig om soorten van de geslachten Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus en Mycobacteria te onderscheiden.

De ureumtest zaaien

De twee methoden vereisen een sterk microbieel inoculum om de resultaten te optimaliseren. Bacteriële kolonies worden bij voorkeur genomen van bloedagar en Sabouraud-agargisten, met enkele uitzonderingen. Het inoculum wordt geëmulgeerd in het vloeibare medium.

Voor de Stuart-ureumvloeistof geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 24 tot 48 uur, wetende dat men alleen zoekt naar stammen van het geslacht Proteus wanneer de stam een ​​bacterie is. Voor gisten kan het worden geïncubeerd bij 37 ° C of bij kamertemperatuur gedurende 24 tot 48 uur incubatie.

In het geval van Christensen-ureumvloeistof incuberen gedurende 24 uur bij 37 ° C. Als de test negatief is, kan deze gedurende maximaal 6 dagen worden geïncubeerd. Als de test vóór 6 uur positief is, geeft dit aan dat het een stam van het geslacht Proteus is.

In het geval van Christensen-ureum-agar wordt de agar-afschuining sterk geïnoculeerd, zonder te prikken. De bouillon wordt op dezelfde manier geïncubeerd en geïnterpreteerd.

Kwaliteitscontrole

Controlestammen kunnen worden gebruikt om het medium te testen, zoals Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 en Salmonella typhimurium.  De eerste twee moeten positieve resultaten geven en de laatste twee negatieve resultaten.

referenties

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Gebruik van Stuart ureumbouillon voor de urease-test, als een test bij de diagnose van gisten. Rev. Soc. Ven. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140. Beschikbaar op: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Biochemische tests voor de identificatie van bacteriën van klinisch belang. 3e druk Redactioneel Panamericana. Buenos Aires Argentinië.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
5. Laboratoria Britania. Christensen Medio (Ureum-agarbasis) 2015. Verkrijgbaar op: britanialab.com