MacConkey Agar foundation, voorbereiding en gebruik

de MacConkey-agar Het is een vast kweekmedium dat de exclusieve isolatie van Gram-negatieve bacillen mogelijk maakt. Om deze reden is het een selectief medium en maakt het ook mogelijk om onderscheid te maken tussen fermenterende en niet-fermenterende bacillen van lactose, wat het een differentieel medium maakt. Het is een van de meest gebruikte kweekmedia in een microbiologisch laboratorium.

Dit medium wordt hoofdzakelijk gebruikt voor de isolatie van Gram-negatieve bacillen die tot de familie behoren Enterobacteriaceae, inclusief opportunistische en enteropathogene soorten.

Het kan ook worden gebruikt om andere enterische bacillen te isoleren die in het maag-darmkanaal verblijven, maar niet tot de Enterobacteriaceae, als Aeromonas sp, Plesiomonas sp, onder andere.

Ten slotte kan het andere gramnegatieve, niet-fermenterende glucosebacillen isoleren die voorkomen in de omgeving, het water of de bodem, maar die soms opportunistische pathogenen kunnen zijn, zoals Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alkaline sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, onder andere.

index

• 1 Foundation
  • 1.1 MacConkey Agar
• 2 Voorbereiding
• 3 Gebruik van conventionele MacConkey-agar
• 4 Andere varianten van MacConkey agar
  • 4.1 MacConkey-agar met sorbitol
  • 4.2 MacConkey Agar zonder kristalviolet of zout
  • 4.3 MacConkey-agar met cefoperazon
  • 4.4 MacConkey Agar bereid met 10% zeewater v / v
• 5 Referenties

stichting

MacConkey Agar

De basis van dit medium kan worden verklaard door de beschrijving van de componenten, omdat elk een doel heeft dat een eigenschap ervan bepaalt.

Galzouten en violet kristal

In deze zin heeft MacConkey agar een complexe samenstelling. Allereerst bevat het galzouten en violet kristal.

Deze elementen zijn verantwoordelijk voor het remmen van de groei van Gram-positieve bacteriën en sommige veeleisende Gram-negatieve bacillen. Op zijn beurt bevordert het de ontwikkeling van Gram-negatieve bacillen die niet door deze stoffen worden aangetast. Dat is de reden waarom het een selectief medium is.

Er wordt gezegd dat het enigszins selectief is in vergelijking met andere media die ook de groei van Gram-positieve bacteriën en ook van de meeste Gram-negatieve bacteriën remmen.

Het is uiterst selectief voor een specifiek geslacht, zoals TCBS-agar voor isolatie van Vibrio cholerae en andere soortgelijke halofiele en alkalofiele soorten.

Peptonen, polypectonen en lactose

Bevat stoffen die de noodzakelijke voedingsstoffen leveren voor de micro-organismen die zich in dit medium ontwikkelen, zoals peptonen, polypectonen en lactose.

Lactose is het belangrijkste punt voor het medium om een ​​differentieel medium te zijn, omdat micro-organismen die het vermogen hebben om lactose te fermenteren sterk roze kolonies zullen ontwikkelen.

Sommige bacteriën kunnen lactose langzaam of zwak fermenteren, lichtroze kolonies ontwikkelen en positieve lactose blijven.

Degenen die lactose niet fermenteren, gebruiken peptonen als energiebron, produceren ammoniak, alkaliseren het medium. Daarom zijn de koloniën die ontstaan, kleurloos of transparant.

PH-indicator

De kleurverandering wordt bereikt door een andere essentiële verbinding met MacConkey-agar. Deze verbinding is de pH-indicator, die in dit geval neutraal rood is.

De fermentatie van lactose genereert de productie van gemengde zuren. Ze verzuren het medium bij een pH lager dan 6,8..

Hierdoor verandert de pH-indicator in een intens roze tint. De intensiteit van de kleur kan variëren afhankelijk van de uiteindelijke pH.

Gedestilleerd water, natriumchloride en agar

Aan de andere kant bevat het gedestilleerd water en natriumchloride dat de hydratatie en het osmotische evenwicht met het medium geeft. Ten slotte bevat het medium agar, wat de basis is die de consistentie van vast medium verschaft.

Het bereide MacConkey-agarmedium moet een uiteindelijke pH-waarde hebben van 7,1 ± 0,2..

voorbereiding

Voor één liter MacConkey-agar moet 50 g van het gedehydrateerde medium worden gewogen, vervolgens in een fiola worden gebracht en worden opgelost in één liter gedestilleerd water. Na 10 minuten rust wordt het verwarmd door constant te mengen totdat het 1 minuut kookt.

Plaats vervolgens de fiola in de autoclaaf en steriliseer gedurende 20 minuten bij 121 ° C. Na verloop van tijd wordt het uit de autoclaaf verwijderd en toegestaan ​​af te koelen tot een temperatuur van 45 ° C, vervolgens in steriele petrischalen in een laminaire stromingkap of voor de bunsenbrander..

Laat stollen en bewaar in een omgekeerde platenhouder en koel tot gebruik bij 2-8 ° C.

Om een ​​MacConkey-agar te verkrijgen die het door de Proteus-genus geproduceerde opzwepende effect remt, wordt een agararme MacConkey-agar gebruikt..

Gebruik van conventionele MacConkey-agar

MacConkey-agar is opgenomen in alle set kweekmedia die zijn ingericht voor het zaaien van klinische monsters die zijn ontvangen in het laboratorium. Het is ook nuttig in voedselmicrobiologie en milieumicrobiologie.

De variëteit van Gram-negatieve bacillen die in dit medium groeien, brengt fenotypische kenmerken tot expressie die een vermoedelijke diagnose van de soort in kwestie helpen. De grootte, kleur, consistentie en geur van de kolonies zijn bijvoorbeeld enkele van de kenmerken die kunnen leiden.

In deze omgeving, soorten van Escherichia coli, Klebsiella sp en Enterobacter sp sterke roze kolonies produceren, omringd door een gebied van neergeslagen gal.

In zo veel, bacteriën zoals Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp en Hafnia sp ze kunnen zonder kleur verschijnen na 24 uur of lichtroze in 24 -48 uur.

Evenzo produceren de geslachten Proteus, Edwadsiella, Salmonella en Shigella kleurloze of transparante kolonies.

Andere varianten van MacConkey agar

Er zijn andere varianten van MacConkey-agar met specifieke doeleinden. Vervolgens worden ze genoemd:

MacConkey-agar met sorbitol

Dit medium is ontworpen om de enteropathogene stam te onderscheiden (Escherichia coli enterohemorragische O157: H7) van de rest van de stammen van Escherichia coli.

Dit medium verandert de koolhydraatlactose voor sorbitol. De stammen van E. coli enterohemorragische O157: H7 verschillen van de rest omdat ze geen sorbitol fermenteren en daarom transparante kolonies worden verkregen, maar de rest van de stammen E. coli als ze sorbitol fermenteren en de kolonies sterk roze zijn.

MacConkey Agar zonder kristalviolet of zout

Deze agar verschilt veel van klassieke MacConkey-agar, omdat er geen kristalviolette, grampositieve bacteriën kunnen groeien.

Aan de andere kant remt de afwezigheid van zout het verschijnen van zwermen op de agar geproduceerd door enkele darmbacillen, zoals die van het geslacht Proteus, en aldus de isolatie van alle aanwezige bacteriën, waaronder Gram-positieve bacteriën, vergemakkelijken.

MacConkey-agar met cefoperazon

Deze variant van MacConkey-agar is ontworpen om aanvankelijk te isoleren Laribacter hongkongensis en later beseften ze dat het nuttig was voor de isolatie van Arcobacter butzleri. EenBeide zijn licht gebogen negatieve Gram-bacillen die bestand zijn tegen cefoperazon.

Deze bacteriën zijn recent in verband gebracht met de oorzaken van gastro-enteritis en diarree die zijn opgedaan bij Aziatische en Europese individuen, die opkomen als twee krachtige opkomende ziekteverwekkers..

Het antibioticum maakt het mogelijk om de bijbehorende flora van het maagdarmkanaal te remmen, wat gunstig is voor de ontwikkeling van deze bacteriën, waardoor ze niet onopgemerkt blijven, omdat ze 72 uur nodig hebben om te groeien.

MacConkey Agar bereid met 10% zeewater v / v

Deze variant is nuttig voor de evaluatie van bacteriële gezondheidsindicatoren voor fecale besmetting, inclusief totale coliformen en fecale coliformen in recreatieve zoute wateren (stranden en baaien).

Cortez et al. 2013 toonden aan dat het op deze manier bereide medium het herstel van deze micro-organismen in de zoute omgeving aanzienlijk verhoogt, vergeleken met het gebruik van MacConkey-agar bereid met gedestilleerd water..

Dit komt omdat het gemodificeerde medium de groei van bacteriën stimuleert die fysiologisch in een toestand van rusttoestand zijn "levensvatbaar maar niet cultiveerbaar", daarom zijn ze niet herstelbaar in conventionele media.

referenties

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Gebruik van cefoperazon MacConkey-agar voor selectieve isolatie van Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. "MacConkey Agar." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 4 april 2018, 18:16 uur UTC. 29 december 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Argentinië. Panamericana S.A Editorial.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5de ed.). Argentinië, redactie Panamericana S.A..
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effect van kweekmedia bereid met zeewater op gezondheidsindicatoren in zeewateren van Chichiriviche spa's, Falcón, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktische klinische microbiologie. University of Cadiz, 2e editie. UCA-publicatieservice.