Voedzame agar foundation, bereiding en gebruik

de voedzame agar het is een niet-selectief en niet-differentieel vast kweekmedium. In deze omgeving groeien allerlei soorten bacteriën die vanuit voedingsoogpunt niet veeleisend zijn.

Het is een eenvoudig middel en bevat, ondanks zijn naam, een lagere voedingswaarde in vergelijking met andere vergelijkbare media, zoals infusie-agar van het hersenenhart of trypticase-soja-agar..

Het nut ervan in het laboratorium is zeer gevarieerd. Hoofdzakelijk gebruikt voor de subcultuur van soorten, het onderhoud van stammen, het tellen van kolonies, als een basis voor het bereiden van bloedagar, onder andere.

Eveneens, vanwege zijn lichtbeige kleur, de productie van pigmenten gegenereerd door sommige bacteriestammen, zoals het groenachtige pigment van Pseudomonas aeruginosa, het rode baksteenpigment geproduceerd door Serratia marcescens bij kamertemperatuur, het goudgele pigment van Staphylococcus aureus, onder andere.

Bovendien is het een van de meest economische groeimedia die er op de markt te vinden zijn.

index

• 1 Foundation
• 2 Samenstelling
• 3 Voorbereiding
• 4 Gebruik
  • 4.1 Als basis voor de bereiding van bloedagar
  • 4.2 Stimuleer de sporenvorming van sporenvormende bacteriën
  • 4.3 Stamonderhoud
  • 4.4 Kolonieaantallen
  • 4.5 Uitvoering van diagnostische tests
  • 4.6 Terugwinning van mesofiele aerobe recreatieve zoute wateren (stranden)
• 5 Referenties

stichting

Zoals eerder vermeld, is het een zeer eenvoudig middel dat gebaseerd is op het verstrekken van voedingsstoffen voor bacteriegroei zonder beperking en zonder complexe reacties om te interpreteren.

Omdat het medium doorschijnend is, is het ideaal voor het tellen van kolonies door de methode van zaaien op diepte.

samenstelling

Het is hoofdzakelijk samengesteld uit vleesextract of gistextract, peptonen of digestie van alvleeskliergelatine, agar-agar, natriumchloride en gedestilleerd water.

Het extract van vlees of gist en peptonen vertegenwoordigt de bronnen van koolstof en essentiële mineralen (stikstof, fosfor en zwavel), die door bacteriën als energiebron en groeifactoren zullen worden gebruikt.

Evenzo is agar-agar de basis van alle vaste groeimedia, ter vervanging van gelatine, wat de eerste basismassa was die Robert Koch gebruikte om zijn media stevige consistentie te geven..

Agar is een polysaccharide bestaande uit galactose, galactomannan, agarose en agaropectine. Het zet op 40 ° C en smelt bijna 100 ° C.

Op zijn beurt verschaft natriumchloride het medium de osmolariteit die nodig is voor bacteriële ontwikkeling.

Uiteindelijk dient het water om de gelyofiliseerde verbindingen te hydrateren en op te lossen. Gedestilleerd water aangepast tot neutrale pH moet worden gebruikt. Kraanwater mag niet worden gebruikt omdat het calcium en magnesium bevat dat kan reageren met de fosfaten in het medium en onoplosbare zouten kan vormen.

voorbereiding

Voor één liter voedingsagar moet 31 g van het gedehydrateerde medium worden gewogen. Het wordt in een fiola geplaatst en opgelost in een liter gedestilleerd water. Na 5 minuten rusten, verwarmen over een warmtebron en constant mengen tot het 1 of 2 minuten kookt.

Plaats vervolgens de fiola in een autoclaaf en steriliseer gedurende 20 minuten bij 121 ° C.

Aan het einde van de tijd wordt het uit de autoclaaf verwijderd en in steriele petrischalen geserveerd met behulp van een laminaire stroming of de bunsenbrander..

Als de petrischalen disposable (plastic) zijn, moet het medium worden verdeeld als de agar een temperatuur van ongeveer 50 ° C heeft, om te voorkomen dat ze vervormen door overmatige hitte.

Laat stollen en bewaar in een omgekeerde platenhouder en koel tot gebruik bij 2-8 ° C.

De platen moeten worden getemperd voordat ze worden gezaaid. Voedende agarplaten mogen niet worden gebruikt als ze besmet of uitgedroogd zijn.

De pH van het bereide medium moet worden ingesteld op 7,3 ± 0,2.

toepassingen

Het is het eenvoudigste kweekmedium dat wordt gebruikt in het microbiologisch laboratorium. De formulering is uitstekend voor de groei van niet-veeleisende bacteriën.

De belangrijkste toepassingen worden hieronder uitgelegd:

Als basis voor de bereiding van bloedagar

Dit medium wordt soms gebruikt als basis voor het bereiden van bloedagar, maar het is niet de meest gebruikte base.

Stimuleer de sporenvorming van sporenvormende bacteriën

Dit kweekmedium is in het bijzonder bruikbaar voor het stimuleren van de sporenvorming van sporenvormende bacteriën zoals Bacillus sp.

Om dit te doen, wordt een stam van het geslacht gezaaid bacil en geïncubeerd gedurende 24 uur bij 37 ° C in aerobiose. Zodra de kolonies zijn gekweekt, wordt de plaat onderworpen aan een spanning door temperatuur, dat wil zeggen, de temperatuur van de kachel wordt verhoogd tot 44 ° C en 24 uur langer verlaten of het wordt 24 uur in een koelkast geïntroduceerd.

Aan het einde van het gewas worden de kweken uitgebreid en gekleurd met Gram-vlek of sporenvlekken van Shaeffer-Fulton. In hen zullen de bacillen met endosporen (sporen binnen de bacil) en exosporen (sporen buiten de bacillus) worden waargenomen..

Stamonderhoud

Sommige onderzoekslaboratoria of universitaire onderwijsondersteunende laboratoria moeten levensvatbare, klinisch belangrijke bacteriën zo lang mogelijk behouden, om de bacteriebank (bacteriotheca) te gebruiken voor onderzoekswerkzaamheden of voor het voorbereiden van onderwijspraktijken. Studenten zullen leren om deze micro-organismen te manipuleren en identificeren.

De voedingsagar, evenals infusie-agar van het hersenenhart, kan voor dit doel worden gebruikt. De agar wordt voorbereid, in met bakeliet bedekte buizen gegoten en op een basis gekanteld, zodanig dat de agar stolt en een blok vormt aan de onderkant en een afschuining op het oppervlak (fluitpiek)..

Elke buis is gelabeld door de naam van de te planten bacteriën en de datum te vermelden. Op de lunette wordt elk van de bacteriën geplant en gedurende 24 uur geïncubeerd. Zodra de kolonies zijn gegroeid, worden de buizen bij kamertemperatuur bewaard..

De bacterioteca moet worden vernieuwd van 1 tot 3 maanden, om besmetting en uitdroging van het medium en de dood van bacteriën te voorkomen.

Alleen niet-veeleisende bacteriën kunnen op deze manier worden gehandhaafd.

Kolonie tellen

Hoewel er gespecialiseerde middelen zijn voor het tellen van kolonies, zoals de standaard tel-agar, kan voedings-agar voor dit doel worden gebruikt, hetzij door op het oppervlak te zaaien met een drigalski-spatel of door diepte. Daarom is het zeer nuttig in de microbiologische analyse van voedsel en water.

Uitvoering van diagnostische tests

Omdat het een medium is dat geen bloed of een ander additief bevat, is het ideaal om in dit medium gekweekte kolonies te nemen om de catalase-test uit te voeren.

Eveneens is het, vanwege de heldere kleur, aangewezen om oxidase testen direct uit te voeren op een gebied van de geënte agar, zonder interferentie.

Herstel van mesofiele aerobe recreatieve zoute wateren (stranden)

Voedingsagar bereid met 10% zeewater is nuttig voor de evaluatie van mesofiele aeroben in het strandwater.

Op deze manier kunnen we het niveau van echte besmetting dat het water met deze micro-organismen heeft, waarderen, omdat in dit type monsters de resultaten overlappen bij het gebruik van kweekmedia die op de conventionele manier zijn bereid.

Dit werd aangetoond door Cortez et al. in 2013 in een onderzoekspaper.

Dit is verklaarbaar als gevolg van de abrupte verandering die de bacteriën ondergaan wanneer ze van een hyperzoutige omgeving naar een zoutarm milieu gaan, daarom gaan de micro-organismen in een staat van lethargie waarin ze levensvatbaar zijn, maar niet cultiveerbaar.

referenties

1. "Voedzame agar." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 13 sep 2016, 20:33 UTC. 29 december 2018, 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Argentinië. Panamericana S.A Editorial.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5de ed.). Argentinië, redactie Panamericana S.A..
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effect van kweekmedia bereid met zeewater op gezondheidsindicatoren in zeewateren van Chichiriviche spa's, Falcón, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M en Cardoso M. Microbiologische kwaliteit van water voor het insemineren van doses, voor Suinos.Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktische klinische microbiologie. University of Cadiz, 2e editie. UCA-publicatieservice.