Papa dextrose foundation, bereiding en gebruik

de papa dextrose-agar het is een stevig, niet-selectief voedzaam kweekmedium. Het kan bacteriële en schimmelsoorten groeien, maar het gebruik ervan is vooral aangewezen voor de isolatie van filamenteuze schimmels en gisten. Het is ook bekend als een PDA-medium door de Engelse uitdrukking Potato Dextrose Agar.

Het is met name handig voor de isolatie van fytopathogene schimmels, dat wil zeggen planten die schade aanrichten. Voor het planten van de monsters van geïnfecteerde planten, kunnen andere media zoals Sabouraud-agar of malta-agar worden gebruikt, echter, voor routinegebruik, heeft aardappeldextrose-agar de voorkeur vanwege grotere sporulatie..

Het wordt ook gebruikt voor het tellen van schimmelkolonies in monsters van cosmetica, farmaceutische producten en sommige zuivelproducten. Evenzo is het gunstig om monsters van huidafkrabsels te planten op zoek naar dermatofyten, die zeer goed groeien in dit medium en hun karakteristieke pigmenten ontwikkelen..

Het aardappeldextrosemedium is een zeer eenvoudige en gemakkelijk te bereiden in het laboratorium. Het bevat, zoals de naam al aangeeft, aardappelinfusie, dextrose en agar-agar. Bovendien kunnen remmende stoffen worden toegevoegd om bacteriegroei te voorkomen en selectiviteit voor schimmelsoorten te vergroten.

index

• 1 Foundation
• 2 Voorbereiding
  • 2.1 - Zelfgemaakte (niet-commerciële) bereiding van papa dextrose-agar
  • 2.2 - Commerciële bereiding van papa dextrose-agar
• 3 Gebruik
  • 3.1 Werkwijze voor het planten van plantmonsters op aardappel dextrose-agar
  • 3.2 Werkwijze voor het planten van monsters van huid-, haar- of nagelschubben op papa dextrose-agar
  • 3.3 Identificatieprocedure
  • 3.4 Aantal kolonies
  • 3.5 Handhaving van schimmelstammen
• 4 Kwaliteitscontrole
• 5 Referenties

stichting

Papa dextrose-agar is een kweekmedium dat de nodige voedingselementen levert voor de ontwikkeling van filamenteuze schimmels en gisten.

De combinatie van aardappelinfusie met glucose biedt de perfecte energiebron voor een bevredigende groei van schimmels. Terwijl de agar degene is die zorgt voor consistentie in de omgeving.

Het medium alleen remt de groei van bacteriën niet, dus het is een niet-selectief medium. Om het selectief te maken, heeft u de toevoeging van remmende stoffen zoals wijnsteenzuur of antibiotica nodig.

voorbereiding

-Zelfgemaakte (niet-commerciële) bereiding van aardappeldextrose-agar

Petrischalen

Het is op de volgende manier voorbereid:

Allereerst worden aardappelen heel goed gewassen, waardoor het vuil wordt verwijderd. Ze worden met alles en schaal in dunne plakjes gesneden. 200 g aardappelen worden gewogen en gedurende een half uur in een liter gedestilleerd water aan de kook gebracht.

Nadat de tijd is gefilterd of gespannen alle voorbereiding door een gaas.

De verkregen vloeistof wordt aangevuld met gedestilleerd water tot het een liter bereikt. Aan de infusie worden 20 g agar-agar en 20 g dextrose toegevoegd, goed gemengd en geautoclaveerd bij 121 ° C, bij 15 pond druk gedurende 15 minuten.

Laat afkoelen tot 50 ° C en serveer in steriele Petrischalen. Bereide platen worden bewaard in een koelkast.

blokken

Je kunt ook papa dextrose-agarwiggen maken.

In dit geval worden vóór het steriliseren in de autoclaaf 12 tot 15 ml van het medium in buizen geplaatst, vervolgens worden ze geautoclaveerd en bij het verlaten liggen ze op speciale dragers tot ze gestold zijn. Bewaar in de koelkast.

Het medium blijft op een pH van 5,6 ± 0,2, maar sommige laboratoria voegen 10% wijnsteenzuur toe om de pH te verlagen tot 3,1 ± 0,1 om bacteriegroei te remmen.

In dezelfde zin geven andere laboratoria er de voorkeur aan om antibiotica toe te voegen om het selectief te maken voor de teelt van schimmels en de ontwikkeling van bacteriën te voorkomen.

-Commerciële bereiding van aardappeldextrose-agar

Weeg 39 g van het in de handel verkrijgbare gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Laat 5 minuten rusten.

Het mengsel wordt verwarmd door vaak te roeren tot het volledig is opgelost. Vervolgens gesteriliseerd in een autoclaaf bij 121 ° C gedurende 15 minuten.

Borden of wiggen kunnen worden voorbereid. Ga verder zoals hierboven beschreven.

De pH blijft bij 5,6 ± 0,2. Als de pH van 3.1 gewenst is, moet 14 ml 20% steriel wijnsteenzuur worden toegevoegd voordat het op de platen wordt geserveerd..

De kleur van het niet-voorbereide medium is beige en bereid is licht oranje met een licht troebel of opalescent uiterlijk.

toepassingen

WERKWIJZE VOOR HET PLANTEN VAN PLANTEN MONSTERS IN AARDETEXTRUS AGAR

-Voor bladeren met vlekken

De bladeren worden in stukken gesneden.

In een 50cc-glas met 50% alcohol plaatst u de stukjes van de bladeren (stukjes gekleurd en gezond) om het oppervlak gedurende 20 tot 30 seconden te desinfecteren. Trek aan de alcohol en voeg 20% ​​natriumhypochloriet toe gedurende 40 tot 50 seconden als het dunne bladeren zijn en verhoog de tijd tot 80 seconden als het schors en boomstammen zijn.

Trek aan het natriumhypochloriet en neem de ontsmette stukken met een steriele clip en plaats deze op het oppervlak van het medium (maximaal 10 stuks). Plaats de datum en incubeer van 20 tot 30 ° C.

-Voor fruit en knollen

Als de vrucht vlezig is, open dan het fruit dat door de schimmel is aangetast en neem stukjes met een steriel scalpel, zowel het zieke deel als het gezonde deel, en plaats het op het oppervlak van de agar..

Als de vrucht citrus is, zoals een citroen of een sinaasappel, moet je je zaden openen en zaaien.

Wanneer het oppervlak van de vrucht wordt aangetast en sporen worden waargenomen, is het het beste om de geraspte methode op de plaat te gebruiken; dit bestaat uit het aanraken van de sporen met een spatel in de vorm van "L", gesteriliseerd en afgekoeld, en vervolgens 2 tot 3 keer zigzag zaaien op de agar.

-Voor granen

Ze worden gedesinfecteerd zoals beschreven in de bladeren en vervolgens op de agar geplaatst.

-Voor takken en stelen

Een schraap van de schors wordt uitgevoerd en dan worden delen van het gezonde en zieke deel direct op de agar gezaaid en gezaaid..

De ingezaaide platen worden 72 uur bij 20-30 ° C in aerobio's geïncubeerd.

Werkwijze voor het planten van monsters van huid-, haar- of nagelschubben op papa dextrose-agar

Het monster moet worden genomen met behulp van een scalpelblad nr. 11, ofwel om aangetast haar, huidschilfers of nagels af te snijden op zoek naar dermatofyten. Alvorens het monster te nemen, moet het gebied worden gedesinfecteerd met 70% alcohol.

-Huidmonster

Bij schilferige laesies moet de rand van de laesie worden afgeschraapt, omdat de schimmel vaker zal worden aangetroffen.

Bij exsudatieve laesies wordt het monster met een droog of nat wattenstaafje genomen. Zaai onmiddellijk op aardappel dextrose-agar of Sabouraud-agar. Vermijd vervoermiddelen.

Een andere manier van bemonsteren is via de tapijtvierkantentechniek van Mariat en Adan Campos. In dit geval wordt het aangetaste gebied 5 keer gewreven met een stukje steriele wol voor verdere kweek.

Het monster kan direct in het kweekmedium worden geplaatst.

-Haar monster

Afhankelijk van de pathologie, kan het getroffen deel worden afgesneden of afgescheurd door de wortels. Plaats het monster in het kweekmedium.

-Vingernagel monster

U kunt een bepaald deel van de betreffende nagel schrapen of snijden. Dit is afhankelijk van het type letsel.

Snijd het monster in stukken van 1 mm vóór het zaaien om de kans op contact van de schimmel met het kweekmedium te vergroten.

Identificatieprocedure

De in de plaat verkregen kolonies worden geïsoleerd in buizen die aardappeldextroseagar bevatten om de macroscopische studie van de kolonies uit te voeren (uiterlijk, kleur, consistentie, ontwikkelingsgraad)..

De microscopische studie (observatie van structuren en hun formaties), kan gedaan worden door microcultures of directe observatie onder de microscoop tussen lamina en lamellen.

Kolonie tellen

Dit medium kan ook worden gebruikt voor het bepalen van de belasting van schimmels en gisten die aanwezig zijn in plantenmonsters, voedsel, cosmetica of medicijnen. Voor dit doel wordt papa dextrose-agar aangevuld met antibiotica gebruikt, zoals: (chlooramfenicol, chloortetracycline of beide).

Giet 1 ml van het monster - bij voorkeur verdund - in een steriele en lege petrischaal, smelt dan een aardappeldextrose-agarstop en laat afkoelen tot 45 ° C. Giet over de petrischaal en roteer tot het gehomogeniseerd is. Laat het rusten totdat het stolt.

Incubeer in aerobiosis bij 20-25 ° C (schimmels) of bij 30-32 ° C (gist) gedurende 5 tot 7 dagen of meer, afhankelijk van het type schimmel dat wordt gezocht en het type monster. Twee platen kunnen worden gebruikt om in beide temperatuurbereiken te incuberen.

Handhaving van schimmelstammen

Papa dextrose-agar kan worden gebruikt om levensvatbare schimmelstammen gedurende meerdere jaren te handhaven.

Om dit te doen, wordt de schimmel gekweekt in papa dextrose agarwiggen en als de schimmel eenmaal is gegroeid, is deze bedekt met minerale olie. De olie moet 45 minuten in een autoclaaf worden gesteriliseerd en hebben een viscositeit van ongeveer 300 tot 330 Saybolt. De olie moet de afgeschuinde punt met 1 tot 2 cm overschrijden.

Kwaliteitscontrole

Van elke bereide batch dienen een of twee platen te worden genomen en gedurende 48 uur bij 25 ° C of 96 uur bij 20 ° C te worden geïncubeerd. Een goede steriliteitscontrole is er een waarbij er geen kolonies zijn.

Ook bekende of gecertificeerde controlestammen zoals:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. In alle gevallen wordt een goede groei verwacht.

referenties

1. Laboratoria Britania. Papa glucosado-agar. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
2. Neogen Laboratories Aardappel dextrose-agar. Beschikbaar bij: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab-laboratorium Aardappel dextrose-agar. Beschikbaar bij: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
5. Casas-Rincon G. Algemene mycologie. 1994. 2de uitgave Universidad Central de Venezuela, Bibliotheekedities. Venezuela, Caracas.
6. Aceituno M. Evaluatie van microbiologische kwaliteit in oogschaduw, compacte poedertype van een nationaal productielaboratorium, volgens Pharmacopeia Usp-referentiemethode 2005. Thesis om in aanmerking te komen voor de titel van farmaceutisch chemicus. Universidad de San Carlos de Guatemala.
7. Cuétara M. Verwerking van oppervlaktemonsters. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007; pp. 1-12