Agar Sabouraud foundation, voorbereiding en gebruik



de Sabouraud-agar, Ook bekend als Sabouraud dextrose-agar, is het een vast kweekmedium, vooral verrijkt voor de isolatie en ontwikkeling van schimmels, zoals gisten, schimmels en dermatofyten..

Daarom mag dit middel niet ontbreken in een microbiologisch laboratorium om de aanwezigheid van pathogene of opportunistische schimmels te onderzoeken, hetzij uit klinische of niet-klinische monsters. Evenzo is het ook ideaal voor de groei van filamenteuze bacteriën zoals Streptomyces en Nocardia. Het gebruik ervan is zeer breed, het kan worden gebruikt in de menselijke, dierlijke, plantaardige en industriële mycologie.

Dit medium werd in 1896 gemaakt door de beroemde dermatoloog Raimond Sabouraud, die een wereldberoemde specialist werd in aandoeningen van de hoofdhuid, voornamelijk veroorzaakt door dermatofyten..

De creatie ervan was zo belangrijk dat het sindsdien is gebruikt en het gaat nog steeds door, zij het met enkele aanpassingen.

Hoewel het speciaal is voor schimmels, kunnen bacteriën in dit medium groeien, daarom is voor monsters met gemengde flora de opname van antibiotica in hun preparaat vereist en dus remmen ze de groei van bacteriële flora die aanwezig kan zijn.

De keuze van het antibioticum moet met zorg gebeuren en rekening houdend met het type schimmel dat u wilt herstellen, omdat sommige worden geremd in de aanwezigheid van bepaalde stoffen.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Meest gebruikte combinaties van Sabouraud dextrose-agar met antibiotica
  • 2 Voorbereiding
    • 2,1 Dextrose Sabouraud Agar 
    • 2.2 Sabouraud dextrose-agar (modificatie van Emmons)
    • 2.3 Sabouraud dextrose-agar (modificatie van Emmons) met chlooramfenicol
    • 2.4 Dextrose Sabouraud Emmons-agar met cycloheximide
    • 2,5 Dextrose Sabouraud Agar (Emmons) met chlooramfenicol en cycloheximide
    • 2.6 Andere antibiotica die kunnen worden toegevoegd
  • 3 Speciale overwegingen
  • 4 Kwaliteitscontrole
  • 5 Gebruik
    • 5.1 Primaire teelt
    • 5.2 Sporulatie
    • 5.3 Behoud
    • 5.4 Microcultures
    • 5.5 In de menselijke mycologie
    • 5.6 Dierenmycologie
    • 5.7 Milieucycologie
    • 5.8 Industriële mycologie
    • 5.9 Plantenmycologie
  • 6 Referenties

stichting

Sabouraud dextrose-agar is een medium dat in de oorspronkelijke formulering zwak selectief is, vanwege de zure pH van 5,6 ± 0,2, maar bacteriën kunnen zich nog steeds ontwikkelen, voornamelijk bij langdurige incubaties..

Het medium bevat caseïne-pepton en met pancreas verteerd dierlijk weefsel, dat de koolstof- en stikstofbron levert voor de ontwikkeling van micro-organismen.

Het bevat ook een hoge concentratie glucose, die als een energiebron fungeert en de groei van schimmels ten opzichte van bacteriën bevordert. Allemaal gemengd met agar-agar, een component die de juiste consistentie biedt.

Aan de andere kant kan Sabouraud dextrose-agar selectief zijn als antibiotica worden toegevoegd.

Met antibiotica is het vooral nuttig in wondmonsters, open zweren of elk monster waarin een grote bacteriële besmetting wordt vermoed.

Meest gebruikte combinaties van Sabouraud dextrose-agar met antibiotica

-Sabouraud-agar met chlooramfenicol: ideaal voor het winnen van gisten en filamenteuze schimmels.

-Sabouraud agar met gentamicine en chlooramfenicol: op deze manier groeien de meeste draderige schimmels en gisten, en remt een groot aantal bacteriën, waaronder Enterobacteriaceae, Pseudomonas en Staphylococcus.

-Sabouraud-agar met cycloheximide: het is met name handig voor monsters van de huid of de luchtwegen, zolang het vermoeden dimorfe schimmels zijn.

Cycloheximide moet met voorzichtigheid worden gebruikt; Hoewel het wordt gebruikt voor het remmen van de groei van niet-pathogene of omgevingsschimmels en gisten die als contaminanten in een monster aanwezig kunnen zijn, remt het ook de groei van sommige schimmels, zoals Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp en andere opportunistische schimmels.

-Sabouraud-agar met chlooramfenicol plus cycloheximide: wordt voornamelijk gebruikt om dimorfe dermatofyten en schimmels te isoleren. Het heeft het nadeel dat het sommige soorten opportunistische schimmels als remt Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes of C. neoformans.

-Sabouraud agar met chlooramfenicol, streptomycine, penicilline G en cycloheximide: ideaal voor extreem monsters verontreinigd met bacteriën en saprofytische schimmels, maar heeft het nadeel dat de groei remt Actinomyces en Nocardias, naast de opportunistische paddestoelen die hierboven zijn genoemd.

voorbereiding

Als u de ingrediënten apart heeft, kunt u deze op de volgende manier bereiden:

Dextrose-agar Sabouraud 

Spijt:

- 40 g dextrose

- 10 g pepton

- 15 g agar-agar

- Meet 1000 ml gedestilleerd water

Alle ingrediënten worden gemengd, de pH wordt op 5,6 ingesteld. Los de opgeloste stoffen op door te koken, verdeel 20 ml van het medium in buizen van 25 x 150 mm, zonder flens en met katoenen top liefst.

Andere buismaten kunnen ook worden gebruikt, afhankelijk van beschikbaarheid.

Ze worden gedurende 10 minuten in een drukatmosfeer (121 ° C) in de autoclaaf behandeld. Overschrijd de autoclavingstijd niet. Bij het verlaten van de autoclaaf worden de buizen met een steun gekanteld totdat ze stollen in een fluitpiek..

Een andere manier is om de ingrediënten op te lossen door het te verwarmen tot het kookt. In dezelfde autoclaaf fiola gedurende 10 minuten en dan 20 ml verdelen in petrischalen.

Als er een Sabouraud-dextrose-agarmedium beschikbaar is, dat al alle ingrediënten bevat, gaan we verder met het wegen van de hoeveelheid die door het bedrijfshuis wordt gespecificeerd voor één liter water. De rest van de stappen zijn dezelfde als die hierboven zijn beschreven.

Dextrose-agar Sabouraud (wijziging van Emmons)

Spijt:

-  20 gr dextrose

- 10 g pepton

-  17 gr agar-agar

-  Meet 1000 ml gedestilleerd water

Alle ingrediënten worden gemengd, de pH wordt aangepast tot 6,9. Ga op dezelfde manier te werk als in het vorige geval.

Er zijn commerciële huizen die medium bieden met alle ingrediënten. Weeg en bereid in dit geval zoals beschreven in de bijlage.

Sabouraud dextrose-agar (modificatie van Emmons) met chlooramfenicol

Voorraadoplossing Chloramphenicol

- Weeg 500 mg chlooramfenicolbasis

- Meet 100 ml ethanol 95%

- mengen

Het Sabouraud-dextrose-agarmedium (Emmons) wordt bereid zoals hierboven beschreven en voegt daarnaast voor elke liter medium 10 ml chlooramfenicol-voorraadoplossing toe vóór het autoclaveren..

Dextrose-agar Sabouraud Emmons met cycloheximide

Cycloheximide stockoplossing

- Weeg 5 gr cycloheximide

- Meet 100 ml aceton

- mengen

Het Sabouraud dextrose-agarmedium (Emmons) wordt bereid zoals reeds is beschreven en voegt bovendien voor elke liter medium 10 ml cycloheximidestamoplossing toe vóór het autoclaveren.

Sabouraud dextrose-agar (Emmons) met chlooramfenicol en cycloheximide

Sabouraud dextrose agarmedium (Emmons) bereid zoals eerder beschreven en verder per liter medium voeg 10 ml chlooramfenicol voorraadoplossing en 10 ml cycloheximide voorraadoplossing voor autoclaveren.

Andere antibiotica die kunnen worden toegevoegd

20.000 tot 60.000 eenheden penicilline per liter medium.

30 mg streptomycine per liter medium.

Beide moeten worden opgenomen na het autoclaveren van het medium, enigszins afgekoeld (50-55 ° C).

0,04 g neomycine per liter medium.

0,04 g gentamicine per liter medium.

Speciale overwegingen

Om veiligheidsredenen wordt de voorkeur plantaardige Sabouraud dextrose agar in wigvormige buizen (hellende ribbelkop) plaats in petrischalen, om dispersie en inhalatie van sporen voorkomen.

Het is belangrijk dat buizen met Sabouraud agar bedekt zijn met katoen en niet met een schroefdop, omdat is aangetoond dat semianaërobe omstandigheden de vorming van sporen in sommige stammen remmen, bijvoorbeeld Coccidioides immitis. Bovendien zijn de meeste schimmels aerobisch.

Als u een schroefdop gebruikt, sluit u niet goed.

Kwaliteitscontrole

De voorbereide media moeten kwaliteitscontrole hebben om hun goede werking te verifiëren. Hiertoe worden bepaalde controlestammen gezaaid.

Voor Sabouraud dextrose-agar met chlooramfenicol kunnen ATCC-stammen worden gebruikt. Candida albicans, die een uitstekende groei moet hebben. Een andere plaat wordt geïnoculeerd met stammen van Escherichia coli, moet volledig worden geremd.

Een niet-geïnoculeerde plaat wordt geïncubeerd waarin geen micro-organisme zou moeten groeien.

Sabouraud dextrose-agar met chlooramfenicol en cycloheximide kunnen worden gebruikt als stammen  Trichophyton mentagrophytes, moet zich goed ontwikkelen. Een andere plaat wordt geïnoculeerd met een stam van Aspergillus flavus, waarin er weinig groei of geen groei moet zijn. Bovendien wordt een niet-geïnoculeerde plaat geïncubeerd om de steriliteit ervan aan te tonen.

Voor Sabouraud dextrose-agar met cycloheximide, stammen van Candida albicans, Trichophyton rubrum  of Microsporum canis, welke een goede groei zou moeten vertonen.

Evenzo een stam van Aspergillus flavus, met weinig groei of geen groei. Eindelijk incubeer een niet-geïnoculeerde plaat voor steriliteitscontrole.

toepassingen

Primaire teelt

Klassieke Sabouraud dextrose-agar bevat 4 gram dextrose en is uitstekend als primair isolatiemedium, omdat het de karakteristieke morfologie van elke schimmel vertoont.

Het is ook uitstekend om de productie van pigmenten te demonstreren. Het is echter niet het meest geschikte middel om sporulatie waar te nemen.

Het is ook niet aan te raden om te groeien Blastomyces dermatitidis, die wordt geremd door de hoge glucoseconcentratie die aanwezig is.

Aan de andere kant moeten bepaalde overwegingen voor de teelt in gedachten worden gehouden.

Sommige schimmels ontwikkelen zich beter bij kamertemperatuur, zoals schimmels, andere ontwikkelen zich met succes bij 37 ° C, zoals sommige gisten, en andere kunnen zich ontwikkelen bij beide temperaturen (dimorfe schimmels).

Om deze reden is het soms noodzakelijk om verschillende Sabouraud-agarplaten te gebruiken voor hetzelfde monster, omdat ze vaak in duplo worden geplant om één plaat bij kamertemperatuur en een andere plaat bij 37 ° C te incuberen..

Bijvoorbeeld, Sporothrix schenckii het is gezaaid in twee platen; één wordt geïncubeerd bij kamertemperatuur om de vormfase te verkrijgen en de andere wordt geïncubeerd bij 37 ° C om de gistachtige fase te verkrijgen, maar in de laatste is het noodzakelijk om 5% bloed aan het medium toe te voegen.

In andere gevallen, zoals in monsters van mycetomen, worden twee platen Sabouraud-agar gezaaid, één met chlooramfenicol en de andere met cycloheximide. De eerste zal de groei van veroorzakers van mycetoma van schimmeloorsprong (Eumicetoma) en de tweede veroorzaker van mycetomas van bacteriële oorsprong, zoals actinomycetomas, mogelijk maken..

sporulatie

De dextrose Sabouraud agar gemodificeerd door Emmons bevat 2 gram dextrose en wordt niet alleen gebruikt voor isolatie, maar ook voor sporulatie en conservering van schimmels.

In dit medium als je de spanningen van kunt herstellen Blastomyces dermatitidis.

behoud

Voor het behoud van schimmelkweken kan worden bewaard in een koelkast (2-8 ° C). De bewaartijd kan variëren van 2 tot 8 weken. Na deze tijd moeten ze worden gesubcultured om het proces te herhalen.

Sommige schimmels kunnen het best op kamertemperatuur worden bewaard, zoals Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum en Microsporum audounii.

Het behoud van de stam kan worden verlengd om pleomorfisme te voorkomen als de dextrose volledig wordt verwijderd van de agar en als de hoeveelheid agar in het medium wordt verlaagd om droogheid te voorkomen.

microculturen

Voor de identificatie van sommige filamenteuze schimmels is het noodzakelijk om microkweken uit te voeren met behulp van Sabouraud agar of andere speciale middelen om de structuren van seksuele en aseksuele voortplanting te observeren.

In de menselijke mycologie

Het wordt voornamelijk gebruikt voor de diagnose van schimmelziekten, vooral die welke de huid en de aanhechtingen (haar en nagels) beïnvloeden.

De monsters kunnen afscheidingen, afscheidingen, huid, haar, nagels, sputum, CSF of urine zijn. De pathogenen die gewoonlijk worden geïsoleerd zijn dermatofyten, schimmels die subcutane en systemische schimmelinfecties veroorzaken.

Dierlijke mycologie

Dieren worden vaak aangetast door schimmelinfecties, dus Sabouraud-agar is even nuttig in dieren als in menselijke mycologie..

Dermatofyten kunnen bijvoorbeeld vaak van invloed zijn op dieren. Zo is het geval Microsporum canis var distortum, dat infecteert vaak honden, katten, paarden, varkens en apen. ook, Microsporum gypseum infecteert honden, katten en vee.

Vogels zoals kippen, hanen en kippen worden getroffen door Microsporum gallinae.

Andere paddenstoelen, zoals Zymonema farciminosum, ze zijn ook een oorzaak van ziekte bij dieren, voornamelijk bij paarden, muilezels en ezels, en produceren een belangrijke ontsteking in de lymfevaten.

Sporothrix schenkii en Histoplasma capsulatum van invloed zijn op huisdieren en menselijke dieren.

Milieucycologie

Veel pathogene of opportunistische schimmels kunnen op elk moment in een bepaalde omgeving worden geconcentreerd, vooral in operatiekamers en Intensive Care Units (ICU) van klinieken en ziekenhuizen. Daarom is het noodzakelijk om ze te besturen.

Andere kwetsbare ruimtes zijn bibliotheken en oude gebouwen, die kunnen worden beïnvloed door de concentratie van omgevingsschimmels.

In milieustudies wordt Sabouraud dextrose-agar gebruikt voor de isolatie van schimmels.

Industriële mycologie

Sabouraud dextrose-agar mag niet ontbreken voor de studie van schimmelcontaminanten bij de productie van cosmetica, voedsel, dranken, leer, textiel, onder anderen.

Plant mycologie

De planten lijden ook aan ziekten veroorzaakt door schimmels, die verschillende delen van de plant aantasten, die zelfs de oogst kunnen beëindigen, wat grote verliezen in de landbouw tot gevolg heeft.

referenties

  1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Microbiologische diagnose van mycosen en gevoeligheidsstudies voor antischimmelmiddelen. Aanbevelingen van de Spaanse Vereniging voor infectieziekten en klinische microbiologie. Beschikbaar bij: coesant-seimc.org
  2. ValteK Laboratorium. (2009). Sabouraud dextrose-agar met cycloheximide. Beschikbaar bij: andinamedica.com.
  3. Navarro O. (2013). Veterinaire mycologie. Nationale Agrarische Universiteit. Nicaragua.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Argentinië. Panamericana S.A Editorial
  5. Casas-Rincon G. Algemene mycologie. 1994. 2de uitgave Universidad Central de Venezuela, Bibliotheekedities. Venezuela, Caracas.