Agarbloedfundering, gebruik en voorbereiding

de bloedagar het is een verrijkt vast medium, differentieel maar niet selectief. Het wordt gebruikt voor het herstel en de groei van een grote verscheidenheid aan micro-organismen uit klinische monsters of subculturen.

Klassieke bloedagar moet worden opgenomen voor het uitzaaien van de meeste klinische monsters die in het laboratorium worden ontvangen; behalve ontlastingsmonsters waar het niet nuttig is, tenzij voorbereid met bepaalde aanpassingen.

Dit kweekmedium bestaat in principe uit een verrijkte basisagar en 5% bloed. De basis van agar kan variëren naargelang de behoeften, maar zal voornamelijk bestaan ​​uit peptonen, aminozuren, vitamines, vleesextract, natriumchloride, agar, onder andere.

Wat bloed betreft, is het gewoonlijk vereist om contact te hebben met een bioterium om bloed van dieren te verkrijgen, zoals schapen, konijnen of paarden. Dit is echter niet altijd mogelijk en soms wordt menselijk bloed gebruikt.

Het bloedagarmedium kan worden bereid in het laboratorium of kan worden gekocht voor bedrijven die eraan zijn toegewijd. De voorbereiding van dit medium is een van de meest delicate, enige onvoorzichtigheid bij de voorbereiding ervan zal resulteren in een verontreinigde partij.

Dat is de reden waarom alle mogelijke voorzorgsmaatregelen moeten worden genomen en op het einde moet een kwaliteitscontrole worden uitgevoerd door het incuberen bij 37 ° C 1 plaat voor elke 100 bereidingen.

index

• 1 Foundation
• 2 Gebruik
  • 2.1 Keuze van bloedgroep
  • 2.2 Keuze van het basisagar-type
  • 2.3 Gebruik van bloedagar volgens het basismedium dat wordt gebruikt voor de bereiding ervan
• 3 Voorbereiding
  • 3.1 Weeg en los op
  • 3.2 Steriliseren
  • 3.3 Aggregatie van bloed
  • 3.4 Giet in de petrischalen
• 4 Referenties

stichting

Er is al vermeld dat bloedagar het kenmerk heeft dat het een verrijkt, differentieel en niet-selectief medium is. De kelder van elk van deze eigenschappen wordt hieronder uitgelegd.

Bloedagar is een verrijkt medium omdat het als hoofdadditief 5-10% bloed op een agar-basis heeft. Beide verbindingen bevatten veel voedingsstoffen en deze eigenschap laat de meeste van de cultuurbare bacteriën erin groeien.

Die groei gebeurt zonder beperking; om deze reden is het niet-selectief. Als echter verbindingen aan dit medium worden toegevoegd die de groei van sommige micro-organismen voorkomen en de groei van anderen bevorderen, wordt het selectief. Dit is het geval als bepaalde soorten antibiotica of antischimmelmiddelen worden toegevoegd.

Evenzo is bloedagar een differentieel medium, omdat het toelaat om 3 soorten bacteriën te onderscheiden: beta-hemolytisch, alfa-hemolytisch en gamma-hemolytisch..

Beta-hemolytische zijn die met de mogelijkheid lyseren of volledig rode bloedcellen te breken, waardoor een heldere halo rond de kolonies produceren waardoor hemolyse of ß ß -hemólisis en micro-organismen worden genoemd beta-hemolytische.

Voorbeelden van ß-hemolytische bacteriën zijn Streptococcus pyogenes en Streptococcus agalactiae.

De alfa-hemolytica zijn die welke een gedeeltelijke hemolyse uitvoeren, waarbij het hemoglobine wordt geoxideerd tot methemoglobine, waardoor een groenachtige verkleuring rond de koloniën wordt gegenereerd. Dit fenomeen staat bekend als hemolyse α of α-hemolyse en de bacteriën zijn geclassificeerd als α-hemolytisch.

Voorbeeld van a-hemolytische bacteriën zijn Streptococcus pneumoniae en Streptococcus van de groep viridans.

Ten slotte zijn er de bacteriën genaamd gamma-hemolytisch of niet-hemolytisch. Deze groeien op de agar zonder er veranderingen in te veroorzaken, een effect dat bekend staat als γ -hemolyse, en de micro-organismen zijn γ -hemolytisch.

Voorbeeld van γ -hemolytische bacteriën: sommige stammen van Streptococcus van groep D (Streptococcus bovis en Enterococcus faecalis).

toepassingen

Het bloedagarcultuurmedium is een van de meest gebruikte in het microbiologisch laboratorium.

Onder micro-organismen kunnen groeien in het agarmedium bloed: strikt aerobe bacteriën, facultatieve, microaërofiele, anaërobe, grampositieve of gramnegatieve bacteriën snel groeiende of langzaam groeiende.

Sommige bacteriën die veeleisende of hinderlijk zijn vanuit een voedingsoogpunt, maar ook schimmels en gisten, groeien ook. Evenzo is het nuttig om stammen die erg zwak metabolisch zijn subcultuur of opnieuw te activeren.

De keuze van het bloedtype en de basisagar zal echter variëren afhankelijk van het waarschijnlijke micro-organisme dat wordt vermoed van herstel en het gebruik dat moet worden gemaakt van de plaque (cultuur of antibiogram)..

Keuze van bloedgroep

Het bloed kan lam, konijn, paard of mens zijn.

Het meest aan te bevelen is lammerenbloed, met enkele uitzonderingen. Bijvoorbeeld om Haemophilus-soorten te isoleren, waarbij het aanbevolen bloed paard of konijn is, omdat het bloed van het lam enzymen heeft die factor V remmen.

Het minst aanbevolen is de mens, maar het is het meest gebruikt, misschien omdat het het gemakkelijkst te verkrijgen is. 

Het bloed moet worden gedefibrineerd, verkregen zonder enig additief en van gezonde dieren. Voor het gebruik van menselijk bloed moeten verschillende factoren in gedachten worden gehouden:

Als het bloed afkomstig is van personen die bacteriële infecties hebben opgelopen, zullen ze specifieke antilichamen hebben. Onder deze omstandigheden is de groei van sommige bacteriën waarschijnlijk geremd.

Als het wordt verkregen uit de bloedbank, bevat het citraat en is het mogelijk dat bepaalde bacteriën zich niet in zijn aanwezigheid ontwikkelen. Aan de andere kant, als het bloed afkomstig is van patiënten die antibiotica gebruiken, kan de groei van gevoelige bacteriën worden geremd.

En als het bloed van een diabetische persoon is, interfereert de overtollige glucose met de juiste ontwikkeling van hemolysepatronen.

Keuze van het basisagar-type

De basisagar die wordt gebruikt voor de bereiding van bloedagar kan zeer breed zijn. Onder hen zijn ze: voedingsagar, hersenen hart infusie agar, trypticasesoja agar, Mueller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar, agar Brucella, Campylobacter agar, etc..

Gebruik van bloedagar volgens het basismedium dat wordt gebruikt voor de bereiding ervan

Voedingsagar

Deze base wordt het minst gebruikt, omdat daarop voornamelijk niet-veeleisende bacteriën groeien, zoals enterische bacillen, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, onder andere. Het wordt niet aanbevolen om Streptococcus te isoleren.

Heart Brain Infusion Agar (BHI)

Het is een van de meest gebruikte als basis voor bloedagar, omdat het de noodzakelijke voedingsstoffen bevat voor de groei van de meeste bacteriën, waaronder Streptococcus sp en andere veeleisende bacteriën. Hoewel het niet gepast is om patronen van hemolyse waar te nemen.

Lambloed wordt meestal gebruikt met deze basis.

Bloedagar-varianten kunnen ook worden bereid, waarbij andere verbindingen worden toegevoegd om bepaalde micro-organismen te isoleren. Bijvoorbeeld, hersenhartinfusie-agar aangevuld met konijnenbloed, cystine en glucose, dient om te isoleren Francisella tularensis.

Overwegende dat, met cystine is telluriet nuttig voor de isolatie van Corynebacterium diphteriae. Je kunt menselijk of lambloed gebruiken.

Bij de eerste zal de beta-hemolyse er uitzien als een smalle halo, terwijl bij de tweede de halo veel breder zal zijn.

Evenzo wordt deze base samen met bacitracine, maïszetmeel, paardenbloed en andere verrijkingssupplementen (IsoVitaleX) gebruikt voor de isolatie van het geslacht Haemophilus sp van respiratoire monsters.

gentamicine of penicilline - - streptomycine paard bloed, is het ideaal voor isolatie van pathogene schimmels veeleisend, zelfs betere prestaties dan Sabouraud glucoseagar Ook als is de combinatie van antibiotica chlooramfenicol toegevoegd. Het is vooral handig bij het isoleren van Histoplasma capsulatum.

Tryptieve soja

Deze basis wordt het meest aanbevolen voor een betere observatie van het patroon van hemolyse en de uitvoering van diagnostische tests zoals taxa van optoquine en bacitracine. Het is de klassieke bloedagar die routinematig wordt gebruikt.

Met deze basis kun je ook de speciale bloedagar bereiden voor Corynebacterium diphteriae, met telluriumcystine en bloed van lam.

Evenzo is de combinatie van deze agar met lambloed plus kanamycine-vancomycine ideaal voor de groei van anaëroben, vooral Bacteroides sp.

Agar Müeller Hinton

Deze basis aangevuld met bloed wordt gebruikt voor het uitvoeren van het antibiogram van veeleisende micro-organismen, zoals Streptococcus sp.

Het is ook nuttig voor de isolatie van bacteriën zoals Legionella pneumophila.

Agar Thayer Martin

Dit medium is ideaal als basis voor bloedagar, vooral wanneer men de Neisseria-soort vermoedt Neisseria meningitidis, als N. gonorrhoeae groeit niet op bloedagar.

Het dient ook voor het uitvoeren van gevoeligheidstests op Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Deze base is uitstekend voor het uitzaaien van monsters van maagbiopten op zoek naar Helicobacter pylori.

Het medium werd bereid door 7% gedefibrineerd schapenbloed met antibiotica (vancomycine, trimethoprim, amfotericine B en cefsulodine) de groei van andere bacteriën die aanwezig kunnen zijn beperken.

Deze zelfde basis aangevuld met menselijk of lambloed, nalidixinezuur en colistine is nuttig voor het isoleren Gardnerella vaginalis. Het is ook ideaal voor het evalueren van antimicrobiële gevoeligheid voor antibiotica van hetzelfde micro-organisme.

Daarnaast wordt het gebruikt voor de bereiding van bloedagar voor het kweken van anaëroben, het toevoegen van aminoglycosiden en vancomycine.

Deze basis stelt ons in staat om de patronen van hemolyse goed te observeren.

Brucella Agar

Dit medium dat als basis voor bloedagaraat wordt gebruikt, samen met de toevoeging van vitamine K, is ideaal voor het kweken van anaerobe bacteriën. In dit geval wordt het gebruik van lambloed aanbevolen.

Campylobacter agar

Campylobacter agar aangevuld met 5% schapenbloed en vijf antibiotica (cefalothine, amfotericine B, trimethoprim, polymyxine B en vancomycine), is het medium gebruikt voor het isoleren Campylobacter jejuni in ontlastingsmonsters.

voorbereiding

Elk commercieel huis brengt aan de achterkant van het pakket de instructies om een ​​liter kweekmedium te bereiden. De overeenkomstige berekeningen kunnen worden gemaakt om de gewenste hoeveelheid te bereiden, afhankelijk van de geselecteerde basisagar.

Weeg en los op

De basisagar komt gedehydrateerd (poeder), dus het moet worden opgelost in gedestilleerd water, aangepast naar pH 7,3.

De hoeveelheid die wordt aangegeven door de gekozen basisagar wordt gewogen en opgelost in de overeenkomstige hoeveelheid water in een fiola, vervolgens verhit tot een gematigde hitte en gemengd met roterende bewegingen totdat al het poeder is opgelost..

steriliseren

Eenmaal opgelost, steriliseert u in een autoclaaf gedurende 20 minuten bij 121 ° C.

Aggregaat van bloed

Laat de fiola bij het verlaten van de autoclaaf afkoelen tot de temperatuur schommelt tussen 40 en 50 ° C; is een temperatuur die de menselijke huid ondersteunt en tegelijkertijd is de agar nog niet gestold.

Hiervoor wordt de fiola met de hand aangeraakt en als de warmte aanvaardbaar is, is het de ideale temperatuur om de overeenkomstige hoeveelheid gedefibrineerd bloed (50 ml per liter agar) toe te voegen. Meng voorzichtig om te homogeniseren.

De passage van het bloedbestanddeel is cruciaal, want als het wordt gedaan wanneer het medium erg heet is, zullen de rode bloedcellen breken en zal het medium niet dienen om hemolyse waar te nemen.

Als het te koud wordt toegevoegd, vormen zich knobbels en het oppervlak van het medium zal niet glad zijn om de fluit goed te maken.

Giet in petrischalen

Serveer in steriele petrischalen onmiddellijk na het homogeniseren van het bloed. Er wordt ongeveer 20 ml in elke petrischaal gegoten. Deze procedure wordt uitgevoerd in een laminaire stroming of in de buurt van de brander.

Wanneer de bloedagar in de petrischalen wordt geserveerd, mogen er geen luchtbellen op het oppervlak van de plaat achterblijven. Als dit gebeurt, wordt de vlam van de Bunsenbrander snel over de plaat gevoerd om ze te elimineren..

De platen laten stollen en worden bewaard in een koelkast (2-8 ° C), omgekeerd totdat ze worden gebruikt. Voor gebruik moeten de bloedagarplaten worden getemperd (laat ze op kamertemperatuur komen) om te worden gezaaid.

De voorbereide platen gaan ongeveer 1 week mee.

referenties

1. Bayona M. Microbiologische omstandigheden voor de teelt van Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktische klinische microbiologie. University of Cadiz, 2e editie. UCA-publicatieservice.
3. "Agar-bloed." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 10 december 2018, 14:55 uur UTC. 27 december 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Argentinië. Panamericana S.A Editorial.
5. CEDIVET Laboratorium Veterinair Diagnostisch Centrum. Guatemala. Beschikbaar bij: trensa.com.
6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5de ed.). Argentinië, redactie Panamericana S.A..