Delen:
Soja-agar tripticaseína foundation, bereiding en toepassingen
de trypticaseïne-soja-agar of trypticase, soja-agar is een vast, niet-selectief en voedzaam kweekmedium. Het is aangeduid met de letters TSA voor zijn afkorting in het Engels Trypticase Soy Agar. Het is samengesteld uit tripteïne, sojapepton, natriumchloride en agar-agar.
Vanwege het hoge voedingsvermogen is het ideaal voor de teelt van matig veeleisende en niet-veeleisende micro-organismen. Het medium zonder supplementen wordt niet aanbevolen voor primaire culturen, maar het is erg handig voor het subkweken van pure stammen en houdt ze levensvatbaar, naast andere toepassingen.
Ook agar dient als basis voor de bereiding van rich media bloed agar, vooral indien vereist om de patronen van hemolyse observeren en te monteren taxa optochin en bacitracine, vereist de diagnose Streptococcus pneumoniae en Streptococcus pyogenes respectievelijk.
Aan de andere kant is het, wanneer het wordt gecombineerd met antibiotica, nuttig om facultatieve en strikte anaerobe micro-organismen van klinisch belang te isoleren uit monsters met gemengde flora..
Ten slotte voldoet de samenstelling van tripticaseine-soja-agar en de prestaties ervan aan de vereisten die zijn vastgesteld door de verschillende farmacopeeën (Europese, Japanse en Noord-Amerikaanse).
index
- 1 Foundation
- 2 Voorbereiding
- 2.1 Tripticaseine-soja-agarplaten
- 2.2 Tripticasein-soja-agarplaten aangevuld met bloed
- 2.3 Tripticasein-soja-agarplaten aangevuld met verwarmd bloed
- 2,4 Wedges van tripticaseine-soja-agar
- 3 Gebruik
- 4 gezaaid
- 5 kwaliteitscontrole
- 5.1 Steriliteitscontrole
- 5.2 Groeicontrole
- 5.3 Beheersing van de groei en het patroon van hemolyse van tripticaseine-soja-agar aangevuld met bloed
- 6 Referenties
stichting
Voor de juiste ontwikkeling van bacteriën is de aanwezigheid van energiebijdragen nodig, zoals aminozuren, vitamines, purinebasen en pyrimidisch.
In deze zin verschaffen tripteïne en soja-pepton deze voedingsstoffen aan micro-organismen, waardoor hun volledige ontwikkeling mogelijk wordt. Voor veeleisende bacteriën is het echter noodzakelijk om deze agar aan te vullen met gedefibrineerd bloed of verwarmd bloed om de verrijking ervan te vergroten.
Aan de andere kant, als antibiotica aan het medium worden toegevoegd, wordt het een selectief medium. Je kunt ook 0,6% gistextract toevoegen om de isolatie van soorten van het geslacht Listeria te bevorderen, terwijl je cystine telluriet toevoegt en Lambloed is ideaal voor Corynebacterium diphteriae.
Ten slotte geeft natriumchloride de osmotische balans aan het medium en verschaft de agar de vaste consistentie.
voorbereiding
Tripticasein-soja-agarplaten
Om trypticaseïne-soja-agar te bereiden, moet 40 gram van het gedehydrateerde commerciële medium op een digitale schaal worden gewogen. Lost op in een liter gedestilleerd water in een fiola.
Het mengsel laat men 5 minuten staan en wordt vervolgens naar een warmtebron gebracht om te helpen bij het oplossen van het medium. Het moet regelmatig worden geroerd en 1 tot 2 minuten laten koken. Vervolgens wordt het medium in de autoclaaf 15 minuten bij 121 ° C gesteriliseerd.
Laat afkoelen tot 50 ° C en verdelen in steriele petrischalen. Laten stollen, omkeren, bestellen in plakken en bewaren in de koelkast.
De uiteindelijke pH van het medium moet 7,3 ± 0,2 zijn.
Er moet rekening worden gehouden met het feit dat de kleur van het gedehydrateerde kweekmedium lichtbeige is en tussen 10 en 35 ° C moet worden bewaard, op een droge plaats.
Van zijn kant is de bereide agar licht barnsteen. Bereide platen moeten tot gebruik in een koelkast (2 tot 8 ° C) worden bewaard.
De platen moeten op kamertemperatuur komen voordat ze worden gebruikt.
Tripticasein-soja-agarplaten aangevuld met bloed
Bloedagar wordt bereid door 5% gedefibrineerd bloed toe te voegen bij het koelen van trypticaseine-soja-agar bij 50 ° C. Het mengsel wordt gehomogeniseerd door het te roteren met zachte bewegingen.
Serveer in de steriele petrischalen. De kleur van het medium moet kersenrood zijn.
Tripticasein-soja-agarplaten aangevuld met verwarmd bloed
De bloedagarbasis bereiden TSA moet de hierboven beschreven procedures te voltooien, maar waarbij de autoclaaf laat staan tot de temperatuur van het medium ongeveer 56-70 ° C Op dat moment wordt het bloed geplaatst en gemengd totdat het medium bruin wordt.
Serveer in steriele petrischalen. De kleur van het medium is chocoladebruin.
Wiggen van tripticaseine-soja-agar
De bereidingswerkwijze van de agar platen zoals beschreven, met het verschil dat in plaats van waar het medium petrischalen verdeeld tussen 10-12 ml buizen met deksel Bakelite vóór autoclaafbehandeling.
Vervolgens worden de buizen gedurende 15 minuten bij 121 ° C in de autoclaaf behandeld. Wanneer ze vertrekken, leunen ze met de hulp van een steun en laten ze stollen.
De bereide wiggen worden gezaaid door het oppervlak en dienen voor het handhaven van bepaalde niet-veeleisende levensvatbare micro-organismen, gedurende een bepaalde tijd.
toepassingen
Trypticaseïne-soja-agar wordt in de volgende gevallen gebruikt:
-Als basis voor het bereiden van de klassieke bloedagar die routinematig wordt gebruikt in de meeste laboratoria.
-De isolatie van veeleisende bacteriën.
-Observatie van het patroon van hemolyse.
-Uitvoering van diagnostische tests.
-Als basis voor het bereiden van speciale bloedagar voor Corynebacterium diphteriae, met telluriumcystine en bloed van lam.
-Als basis voor het bereiden van lambloedagar, meer kanamycine-vancomycine voor de groei van anaëroben, vooral Bacteroides sp.
-Voor onderhoud van niet-veeleisende soorten (Bacterioteca).
-Microbiële aërobe telling in de microbiële limietstudie van monsters van water, milieu, voedsel en cosmetica.
geplant
Monsters kunnen direct worden gezaaid op het oppervlak van trypticaseïne-sojagar aangevuld met bloed of andere additieven. Het wordt gezaaid door uitputting.
Terwijl tripticaseine-soja-agarplaten zonder additieven in het algemeen worden gebruikt voor subcultuur van microbiële stammen (bacteriën of gist).
Kwaliteitscontrole
Steriliteitscontrole
Om de steriliteit van de verschillende media bereid met soja agar trypton basis raadpleeg raden: elke bereide partij worden geïncubeerd 1 of 2 geïnoculeerde platen of buizen bij 37 ° C gedurende 24 uur om de steriliteit te bewijzen. In alle gevallen moet het zonder groei blijven.
Als besmetting wordt gevonden, moet het hele lot worden weggegooid.
Groeicontrole
Om de goede werking van trypticaseïne-soja-agar te bestuderen, kunnen de volgende bacteriestammen worden gebruikt: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 en Enterococcus faecalis ATCC 29212.
De stammen worden gezaaid en 24 uur bij 37 ° C in aerobio's geïncubeerd.
In alle gevallen moet de groei bevredigend zijn.
Je kunt ook paddestoelen gebruiken als het Complex Candida albicans ATCC 10231 en Aspergillus niger ATCC 16404. Voor beide stammen wordt een goede groei verwacht.
Groeicontrole en hemolysepatroon van tripticaseine-soja-agar aangevuld met bloed
Om de goede werking van de met deze basis bereide bloedagar te verifiëren, kunnen de volgende stammen worden gebruikt: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 en Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
Ze worden gezaaid en 24 uur bij 37 ° C in microaerophilicus geïncubeerd.
In alle gevallen moet de groei bevredigend zijn, rekening houdend met die in S. pyogenes bèta-hemolyse (heldere halo rond de kolonie) en in beide stammen van S. pneumoniae alfa-hemolyse (groenachtige halo rond de kolonies) moet in acht worden genomen.
referenties
- Bijdragers van Wikipedia. Trypticase Ik ben agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 17 december 2018, 15:47 UTC. Beschikbaar op: https://en.wikipedia.org
- Laboratoria Britania. Tryteïne-soja-agar. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
- Neogen Laboratories Sojaboon drieluik. Beschikbaar bij: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Argentinië. Panamericana S.A Editorial.
- BD Laboratories Trypticase Ik ben Agar. 2014. Beschikbaar op: .bd.com