Agar TCBS foundation, voorbereiding en gebruik

de TCBS-agar is een zeer selectief en differentieel vast kweekmedium, vooral gebruikt voor de isolatie en kweek van Vibrio-bacteriën Vibrio cholerae, V. vulnificus en V. parahaemolyticus als belangrijke pathogenen van dit geslacht.

Het acroniem TCBS betekent thiosulfaatcitraat-gal-sucrose. Deze agar is ook bekend als het selectieve medium voor Vibrios. De originele formule is gemaakt door Nakanishi en later aangepast door Kobayashi.

Het bestaat uit gistextract, pepton vlees, trypticase, natriumcitraat, natriumthiosulfaat, ox gal, sucrose, natriumchloride, ferricitraat, bromothymolblauw, thymolblauw en agar.

Deze samenstelling zorgt voor een adequate ontwikkeling van de Vibrio-soort uit water, uitwerpselen en voedselmonsters; behalve voor Vibrio hollisae, dat groeit niet in dit medium. Bovendien is het TCBS-medium in staat om de groei van andere begeleidende bacteriën, in het bijzonder coliformen, te remmen.

Vanwege de ernstige gastro-intestinale en extra-intestinale problemen die sommige soorten van het geslacht Vibrio produceren, is hun diagnose erg belangrijk. De mens is voornamelijk besmet door de consumptie van rauw of onvoldoende verhit zeevoedsel of besmet water, maar ook door infectie van wonden.

Daarom moeten klinische laboratoria TCBS-agar opnemen in de studie van ontlastingsculturen van vloeibare stoelgangmonsters, vooral met het uiterlijk van rijstwater. Vooral als de patiënt meldt dat hij in contact is geweest met zeewater of vis of zeevruchten heeft gebruikt.

index

• 1 Foundation
• 2 Voorbereiding
• 3 Gebruik
• 4 gezaaid
• 5 Beperking
• 6 Kwaliteitscontrole
• 7 Referenties

stichting

Gistextract, vleespeptonen en tripteïne zijn de voedingsbron van dit medium. TCBS-agar is echter een onherbergzaam medium voor de meeste bacteriën.

Zijn hoge selectiviteit wordt gegeven door de toevoeging van natriumcitraat en ossengal; beide zijn remmende middelen die ook zorgen voor een alkalische pH-waarde voor het medium, waardoor de groei van de bijbehorende flora wordt beperkt en de groei van V. cholerae, onder andere soorten. Opgemerkt moet worden dat Vibrio cholerae is erg gevoelig voor brandend maagzuur.

Van zijn kant balanceert natriumchloride osmotisch op het medium. Bovendien, aangezien de concentratie ervan hoog is, werkt het ook als een remmend middel, dat de groei van halofiele bacteriën begunstigt.

Sucrose is de fermenteerbare suiker die samen met de blauwe pH-indicatoren van broomthymol en thymolblauw het differentiële karakter aan het medium geven. Om deze reden is het met deze middelen mogelijk om sucrose fermenterende stammen te differentiëren van niet-fermenterende stammen.

De kolonies van de sucrose fermenterende stammen ontwikkelen een gele kleur en zullen het medium van groen naar geel veranderen vanwege de productie van zuren. De niet-fermentoren groeien doorschijnend en het medium blijft de oorspronkelijke kleur (groen).

Evenzo bevat dit medium natriumthiosulfaat als een bron van zwavel en ferri-citraat als een onthullend middel. Beide tonen de bacteriën die waterstofsulfide (kleurloos gas) kunnen produceren. De H₂S wordt gevormd uit het thiosulfaat en later reagerend met ferri-citraat vormt zich een zichtbaar zwart neerslag.

Tot slot, agar is wat de vaste consistentie aan het medium geeft.

voorbereiding

Weeg 89 gram van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter gedestilleerd water. Help op te lossen door te verwarmen en veel te schudden. Het mengsel kan 2 minuten worden gekookt.

Dit medium kan niet worden geautoclaveerd. Na het oplossen wordt het direct op steriele platen geserveerd. Wanneer ze hard worden, worden ze op een omgekeerde manier gerangschikt in plaquemakers en bewaard in een koelkast (2-8 ° C) totdat ze worden gebruikt.

Het medium na de bereiding moet een pH van 8,6 ± 0,2 hebben.

De kleur van het gedehydrateerde medium is lichtbeige of groenachtig beige en de kleur van het medium is bosgroen of blauwgroen.

Het is belangrijk om de platen te laten temperen voordat u de monsters zaait.

gebruik

Het meest voorkomende monster voor de isolatie van Vibrios zijn diarreeontlastingen.

Stoelmonsters als ze niet onmiddellijk op het selectieve medium kunnen worden gezaaid, moeten in het midden van Cary Blair worden getransporteerd.

Om de gevoeligheid van het gewas te verhogen, kan de kruk van deze peptonwater worden gevoerd bij pH 8,4 als verrijkingsmedium gedurende maximaal 8 uur, TCB daar medium doorgekweekt.

Houd er ook rekening mee dat sommige stammen van Vibrio sepsis kunnen veroorzaken bij patiënten met immunosuppressie, zodat ze kunnen worden geïsoleerd uit bloed culturen. Evenzo kunnen monsters van water en voedsel uit de zee worden geanalyseerd wanneer er epidemische uitbraken van cholera-ziekte zijn.

geplant

Het inoculum van het onderzochte monster moet prominent zijn, het zaaien gebeurt door de methode van strying by exhaustion. De platen worden 24 uur geïncubeerd bij 37 ° C in aerobiose.

De vermoedelijke koloniën van Vibrio cholerae Ze zijn middelgroot, glad, ondoorzichtig, met dunne randen en geel omdat ze sucrose fermenteren..

Op een vergelijkbare manier, de soort van V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii en wat V. vulnificus. Andere soorten van Vibrios klinisch belangrijk als V. parahaemolyticus fermenteer geen sucrose, ontwikkelend als olijfgroene kolonies.

Bovendien moet eraan worden herinnerd dat sommige stammen van Aeromonas en Plesiomonas worden oxidase (+) kan groeien op dit medium, het ontwikkelen van gele kolonies die de arts in verwarring kunnen brengen. Terwijl sommige stammen van Pseudomonas ook oxidase (+) groeien als groene kolonies, evenals V. parahaemolyticus.

beperking

Oxidase test is positief voor Vibrio geslacht mag nooit worden gemaakt van TCBS agar kolonies verkregen omdat het resultaat een vals negatief zal zijn. De verbindingen in het medium interfereren sterk in deze test. Daarom zou het moeten worden gedaan van subculturen op bloedagar.

Kwaliteitscontrole

Om aan te tonen dat het medium in goede staat verkeert, is het raadzaam om gekende of gecertificeerde controlestammen te planten en te observeren of de groei voldoet aan de verwachte kenmerken.

Hiervoor zijn soorten van:

-Vibrio cholerae - Bevredigende groei (gele kolonies, doorschijnende rand).

-Vibrio parahaemolyticus - Bevredigende groei (kolonie met groen centrum en doorschijnende rand).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - bevredigende groei (gele kolonies met halo's van dezelfde kleur rond de kolonie).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - totale of gedeeltelijke remming (kleine gele of doorschijnende kolonies).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- gedeeltelijke of totale remming (blauwe kolonies).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Volledig geremd.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Totale of gedeeltelijke remming. (Kleine kolonies centreren groene doorschijnende rand).

Incubatie van een niet-geïnoculeerd medium zou geen verandering moeten hebben.

referenties

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS-agar. 2009. Beschikbaar bij: f-soria.es
2. BD-laboratorium. BD. TCBS Agar 2003. Beschikbaar op: bd.com
3. Laboratoria Britania. TCBS Medium. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
4. Acumedia Laboratories TCBS Agar. 2016. Beschikbaar op: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.