Delen:
Agar Thayer Martin foundation, voorbereiding en toepassingen
de Thayer Martin-agar Het is een zeer voedzaam en selectief vast medium voor de isolatie van Neisseria meningitidis en Neisseria gonorrhoeae; beide bekend als pathogene of klinisch belangrijke Neisseria.
Een van de belangrijkste speciale kenmerken van Thayer Martin-agar is het hoge gehalte aan voedingssupplementen. Deze eigenschap is onmisbaar, omdat de Neisseria's zeer veeleisende micro-organismen zijn vanuit voedingskundig oogpunt en daarom niet groeien in gewone media.
Bovendien, omdat deze microorganismen gewoonlijk worden aangetroffen in steriele gebieden toevoegen van vertragers aan de groei van andere plantensoorten is het noodzakelijk te voorkomen, zonder de ontwikkeling van het genus Neisseria.
Deze agar is samengesteld uit GC-basisagar, hemoglobine, extra voedingssupplementen en een complex van remmende stoffen (antibiotica en antischimmelmiddelen). Commerciële huizen verkopen elk van de supplementen afzonderlijk.
Het in dit medium te planten monster zal afhangen van het micro-organisme waarnaar wordt gezocht. naar Neisseria gonorrhoeae De ideale monsters zijn vaginale en urethrale afscheidingen. Terwijl voor Neisseria meningitidis de meest gebruikte monsters zijn CSF-, keelholte en nasofaryngeale exudaten.
index
- 1 Foundation
- 1.1 GC-basisagar
- 1.2 Hemoglobine
- 1.3 Aanrijkingssupplement
- 1.4 remmers
- 2 Voorbereiding
- 2.1 Originele Thayer Martin Agar
- 2.2 Agar Thayer Martin aangepast
- 3 Gebruik
- 4 Kwaliteitscontrole
- 5 Beperkingen
- 6 Referenties
stichting
De Neisseria's zijn micro-organismen die als hinderlijk worden geclassificeerd en daarom is hun isolatie moeilijk. Om deze reden is de Thayer Martín een complex medium en elk van zijn componenten vervult een functie die hieronder wordt uitgelegd:
GC-kernagar
GC-agar bevat proteose pepton, maïszetmeel, natriumchloride, dikaliumfosfaat, monokaliumfosfaat en agar-agar. Componenten zorgen voor de basis voedingsstoffen voor microbiële groei, neutraliseren giftige vetzuren osmotische balans te behouden, bepalen de pH en zorgen voor consistentie aan het vaste medium.
hemoglobine
Hemoglobine verschaft factoren V en X (respectievelijk nicotinamide-adenine-dinucleotide NAD en hemine). Daarom groeien in deze omgeving Haemophilus-soorten ook. Hemoglobine kan commercieel in gedehydrateerde vorm worden verkregen of vers gedefibrineerd runderbloed kan aan het medium worden toegevoegd.
Verrijkingssupplement
Bovendien zal de gemiddelde Thayer-Martin ook het toevoegen van een supplement verrijking, omdat de voedingsstoffen die de agar grondslag zijn niet voldoende voor de eisen van het genus Neisseria.
Het meest gebruikte verrijkingssupplement wordt isovitalex genoemd. Dit bevat glutamine, adenine, NAD, cocarboxylase, guanine, ijzernitraat, p-aminobenzoëzuur, vitamine B12, thiamine en glucose. Al deze verbindingen zijn nodig voor de juiste ontwikkeling van pathogene Neisseria.
remmers
Omdat het een zeer voedzaam medium is, moeten remmers worden gebruikt om de groei van micro-organismen van de gebruikelijke flora van het gebied te voorkomen en aldus de isolatie van het geslacht Neisseria bevorderen..
Het remmercomplex is samengesteld uit vancomycine, colistine en nystatine. Vancomycine remt de groei van Gram-positieve bacteriën, colistine voorkomt de ontwikkeling van Gram-negatieve bacteriën zoals Pseudomonas en sommige saprofytische Neisseria en nystatine handelt als gist Candida albicans.
Echter, Thayer Martin agar werd gemodificeerd; de veranderingen bestonden uit de toevoeging van trimethoprim, de toename van de hoeveelheid agar en de toevoeging van extra glucose. Deze veranderingen hebben het herstel van soorten van Neisseria gonorrhoeae.
Opgemerkt moet worden dat trimethoprim de groei van het geslacht Proteus en de daaropvolgende vorming van zwermen remt. In deze zin bieden antibiotica het selectieve karakter van het medium Thayer Martin.
voorbereiding
Originele Thayer Martin Agar
-GC Agar
Weeg 8,2 g gedehydrateerd GC-medium af en suspendeer in 100 ml. Meng en kook gedurende 1 minuut met veel roeren om in zijn geheel op te lossen. Steriliseer het mengsel 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ° C.
-2% hemoglobine
Suspendeer 2 g gedehydrateerd hemoglobine in 2 of 3 ml heet gedestilleerd water om een uniform mengsel te vormen. Voeg beetje bij beetje meer water toe om een volume van 100 ml te voltooien. De suspensie moet vóór het steriliseren homogeen zijn.
Steriliseer in de autoclaaf gedurende 15 minuten.
-Verrijkingssupplement
Reconstitueer de commerciële weg met het verdunningsmiddel geleverd door hetzelfde bedrijfshuis. Meng goed. De hoeveelheid te gebruiken verdunningsmiddel zal worden gespecificeerd in de instructies van de kit..
-Remmingstoeslag V.C.N (vancomycine, colistine, nystatine)
Reconstitueer de injectieflacon met het verdunningsmiddel dat door het bedrijfshuis wordt geleverd. Meng goed. De hoeveelheid te gebruiken verdunningsmiddel zal worden gespecificeerd in de instructies van de kit..
-bereid
Ga voor elke 100 ml GC-agar als volgt verder:
Bij het verlaten van de autoclaaf GC agar, laat afkoelen tot een temperatuur van 50 ° C en toevoeging van 2 ml van de hemoglobine-oplossing bereid, supplement 2 ml verrijking (isobitalex of britalex) en 2 ml supplement remming. Meng en serveer in steriele petrischalen.
Laat stollen en bewaar in de koelkast tot gebruik.
De kleur van het geprepareerde medium is kersenrood. De uiteindelijke pH van het medium is 7,2 ± 0,2
Gewijzigde Thayer Martin Agar
Weeg 8,2 g gedehydrateerd GC-medium af en suspendeer in 100 ml. Voeg 1 g agar toe en voeg 0,3 g glucose toe. Meng en kook gedurende 1 minuut met veel roeren om in zijn geheel op te lossen. Steriliseer het mengsel 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ° C.
Bereid hemoglobine en aanrijkingssupplement zoals hierboven beschreven.
Het gebruikte remmingssupplement is V.C.N.T (vancomycine, colistine, nystatine, trimethoprim)..
-bereid
Ga verder zoals beschreven voor de originele Thayer Martin-agar.
gebruik
Thayer Martin-agar moet worden getemperd voordat de monsters worden gezaaid. De veelgebruikte monsters zijn keelontstekingen, nasale exsudaten, vaginale, urethrale en / of rectale secretie en CSF..
Gebruik vers genomen monsters en maak sterke inocula op de agar. De monsters worden rechtstreeks gezaaid door materiaalontlading en vervolgens gestreken door uitputting op het oppervlak.
Platen worden gedurende 24 tot 48 uur in een micro-aerofiele pot (5% CO) bij 35-37 ° C geïncubeerd2). Aan het einde van de incubatieperiode worden de platen onderzocht op kleine, grijze en soms mucoïde-achtige kolonies..
Voer Gram en bevestigende biochemische tests uit bij verdachte kolonies.
Kwaliteitscontrole
Om de kwaliteitscontrole van de Thayer Martin-agar uit te voeren, kunnen de volgende microbiële stammen worden gebruikt.
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 en Neisseria meningitidis ATCC 13090; in beide stammen wordt een bevredigende ontwikkeling verwacht.
De volgende soorten moeten ook worden opgenomen: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 en Candida albicans ATCC 10231. In alle gevallen wordt in dit medium een totale of gedeeltelijke remming verwacht.
beperkingen
-Er moet rekening mee worden gehouden dat bacteriën die resistent zijn tegen de gebruikte remmers in het medium kunnen groeien..
-Er zijn stammen van Neisseria gonorrhoeae die gevoelig kan zijn voor de concentratie van vancomycine die wordt gebruikt. Om deze reden wordt aanbevolen om chocolade-agar aangevuld met isovitalex parallel te gebruiken, maar zonder remmers.
-Er zijn giststammen resistent tegen nystatine die in dit medium kunnen groeien en de isolatie van pathogene Neisseria, in het bijzonder gonococcen, kunnen verstoren..
referenties
- Valtek diagnostische laboratoria. Agar Thayer-Martin.2016. Beschikbaar in: com
- Laboratoria Britania. Thayer Martin gemodificeerd medium. 2010. Beschikbaar op: britanialab.com
- Bijdragers van Wikipedia. Thayer-Martin-agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 26 oktober 2017, 16:33 UTC. Beschikbaar op: wikipedia.org4. Betreden op 28 februari 2019.
- Laboratoria Britania. GC-agar. 2010. Beschikbaar op: britanialab.com.
- Laboratoria BBL ™ Medium-verrijking voor veeleisende micro-organismen. 1999. Beschikbaar in: bd.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.