Agar TSI-stichting, voorbereiding en gebruik



de TSI-agar of ijzer triple sugar agar is een vast kweekmedium dat dient als een biochemische test om de initiële identificatie van Gram-negatieve bacillen te begeleiden. Het is gebaseerd op het aantonen van de fermentatie van de aanwezige suikers en de productie van waterstofsulfide en gas.

De samenstelling en fundering ervan lijkt sterk op de Kligler-ijzertest, met dit verschil dat de laatste alleen glucose en lactose bevat. In plaats daarvan, zoals de naam al aangeeft, bevat drievoudig ijzerijzer drie fermenteerbare koolhydraten: glucose, lactose en sucrose..

Bovendien heeft het TSI-medium vier eiwitderivaten die het tot een zeer voedzame agar maken: gistextract, vleesextract, pepton en proteosepepton. Het bevat ook ijzer (II) ammoniumsulfaat, natriumthiosulfaat, natriumchloride, fenolrood en agar.

Het onvermogen van een micro-organisme om de glucose die in het medium aanwezig is te fermenteren sluit onmiddellijk uit dat hij behoort tot de familie van de Enterobacteriaceae. Vandaar dat deze test essentieel is om te beslissen welke identificatieroute moet worden genomen om het geslacht en de soort te bepalen.

Elk laboratorium beslist of het werkt met TSI-agar of Kligler-agar-agar.

index

  • 1 Foundation
    • 1.1 Natriumchloride en agar
    • 1.2 pH-indicator (fenolrood)
    • 1.3 Eiwitderivaten (gistextract, vleesextract, pepton en proteose pepton)
    • 1.4 Fermentatie van koolhydraten (glucose, lactose en sucrose)
    • 1.5 Gasproductie
    • 1.6 Natriumthiosulfaat en ferro-ammoniumsulfaat (productie van waterstofsulfide)
  • 2 Voorbereiding
  • 3 Gebruik
  • 4 gezaaid
  • 5 Beperkingen
  • 6 Referenties

stichting

Elk van de verbindingen vervult een functie binnen het medium.

Natriumchloride en agar

Natriumchloride is noodzakelijk om het osmotische evenwicht van het medium te handhaven. Terwijl de agar de vaste consistentie geeft.

PH-indicator (fenolrood)

De pH van het bereide medium wordt uitgebalanceerd tot 7,3 en de pH-indicator (fenolrood) wordt geel onder 6,8. Dit betekent dat kleine hoeveelheden zuur geproduceerd door de fermentatie van suikers het medium van roodoranje naar geel zullen veranderen.

Als er geen gisting plaatsvindt, zal het medium alkalisch gemaakt worden door het gebruik van de peptonen, van rood-oranje naar sterk rood.

Eiwitderivaten (gistextract, vleesextract, pepton en proteose pepton)

Wanneer de bacteriën de eiwitten die aanwezig zijn in de TSI-agar metaboliseren, worden amines geproduceerd die het medium alkaliseren (voornamelijk op het schuine vlak), omdat de reactie zuurstof nodig heeft. De amines veranderen de ring in sterk rood.

Maar dit zal afhangen van het vermogen van bacteriën om koolhydraten te fermenteren of niet.

Fermentatie van koolhydraten (glucose, lactose en sucrose)

De studie van de fermentatie van suikers kan verschillende afbeeldingen opleveren en elke wordt anders geïnterpreteerd. De interpretatie van de test verdeelt de micro-organismen in 3 categorieën: niet-glucose fermentoren, niet-lactose fermentoren en lactose / sucrose fermentoren.

Opgemerkt moet worden dat de hoeveelheid glucose in het medium beperkt is, terwijl de concentratie van lactose en sucrose 10 maal hoger is.

De bacteriën van de familie Enterobacteriaceae en andere glucose-fermenterende micro-organismen beginnen deze suiker te fermenteren omdat het de eenvoudigste koolhydraat voor energie is..

Aan de andere kant zijn lactose en sucrose complexe koolhydraten die moeten worden afgebroken en omgezet in glucose zodat ze de Embden-Meyerhof-cyclus kunnen binnengaan.

-Niet-fermenterende glucosemicro-organismen

Wanneer het geënte micro-organisme niet in staat is om glucose te fermenteren, kan veel minder andere koolhydraten fermenteren. Daarom worden hier geen zuren gevormd, maar er is aminevorming in de schuine kant als gevolg van het gebruik van peptonen.

In dit geval wordt de afschuining naar een sterker rood en de onderkant van de buis kan onveranderd blijven of kan ook alkalisch zijn, waardoor de hele rode buis achterblijft.

Interpretatie: K / K betekent alkalische afschuining / alkalische of neutrale achtergrond

Op de foto is het begin van het artikel te zien beeldbuis D.

Dit resultaat geeft aan dat het micro-organisme niet tot de familie van de Enterobacteriaceae behoort.

-Niet-fermenterende micro-organismen van lactose / sucrose

Als de bacteriën glucose kunnen fermenteren maar geen lactose of sucrose, gebeurt het volgende:

De bacterie zal alle aanwezige glucose na ongeveer 6 tot 8 uur consumeren, in staat om zowel de schuine kant als de taco aan te zuren; dat wil zeggen, de agar is helemaal geel geworden. Maar wanneer de glucose is opgebruikt en het onvermogen om lactose en sucrose te gebruiken, zullen de bacteriën het metabolisme van eiwitten beginnen.

Deze reactie heeft zuurstof nodig, daarom vindt de afbraak van de peptonen plaats op het oppervlak (afschuining). De geproduceerde amines alkaliseren de ring door geel naar rood te worden. Deze reactie wordt bewezen bij 18 tot 24 uur incubatie.

Interpretatie: K / A betekent alkalische afschuining en zure taco.

In de afbeelding die aan het begin van het artikel staat, ziet u de afbeelding van tube B.

-Lactose / sucrose fermenterende micro-organismen

De micro-organismen kunnen lactose en sucrose natuurlijk fermenteren kan glucose fermenteren. Nadat de minimale hoeveelheid glucose in het medium is uitgeput, het pyruvaat gevormd begint te metaboliseren zuren door middel van aërobe Krebs cyclus vormen, en de periode van 8-12 uur alle medium geel.

Als de bacterie in staat is om lactose of sucrose te splitsen, zullen er nog steeds zuren worden geproduceerd en na 18 tot 24 uur blijven de hele buis - bek en taco - geel.

Opgemerkt moet worden dat het gebruik van glucose op twee manieren wordt gedaan: één in aërobe vorm in de schuine kant van de buis, en de andere anaëroob in de bodem van de buis.

Interpretatie: A / A betekent zure afschuining / zuurbodem. Het kan gas presenteren of niet.

In de afbeelding die aan het begin van het artikel staat, ziet u de afbeelding van tube A.

Gasproductie

Sommige micro-organismen zijn in staat om gas te produceren tijdens de fermentatie van suikers. Het gas wordt in de buis aangetoond door de druk die het uitoefent in de agar. De druk veroorzaakt de vorming van bellen of de verplaatsing van de agar. Soms kan gasvorming het medium doen scheuren.

Het is belangrijk dat op het moment van het zaaien van het TSI-medium, de punctie netjes wordt gemaakt door het midden van de agar totdat deze de bodem bereikt. Als de punctie naar de wanden van de buis wordt geleid, kan deze vals positieve resultaten bij de productie van het gas veroorzaken, omdat deze door het verkeerd gevormde kanaal zal ontsnappen.

Gasproductie en de reacties die optreden in de ring agar, zuurstof nodig, daarom aanbeveling dat de buis wordt afgedicht met katoenen prop, en als Bakeliet dop wordt gebruikt, moet dit niet volledig vastgesteld.

Gasproductie wordt gemeld als positief (+) of negatief (-).

Natriumthiosulfaat en ferroammoniumsulfaat (productie van waterstofsulfide)

Bacteriën die waterstofsulfide (kleurloos gas) kunnen produceren, nemen de zwavel van natriumthiosulfaat in het medium. Zodra de H is gevormd2S reageert met ferro-ammoniumsulfaat en produceert ijzersulfide (zwart neerslag duidelijk zichtbaar).

De productie van H2S wordt gemeld als positief (+) of negatief (-).

In de afbeelding die aan het begin van het artikel staat, zie de afbeelding van de tube C.

voorbereiding

Weeg 62,5 gram gedehydrateerde drievoudige-suikersuiker (TSI) agar af en los op in 1 liter gedestilleerd water.

Verwarm tot de agar volledig is opgelost. Laat het een paar minuten koken en roer regelmatig. Verdeel 4 ml van het medium in 13/100 reageerbuisjes met katoenen deksel.

Steriliseer in een autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Verwijderen uit de autoclaaf en laten rusten op een hellende manier. Zorg ervoor dat zowel de basis als de ring dezelfde afstand hebben.

Bewaren in de koelkast 2-8 ° C. Laten temperen voordat de bacteriestam wordt geplant.

De kleur van het gedehydrateerde medium is lichtbeige en het geprepareerde medium is roodoranje

De uiteindelijke pH van het bereide medium is 7,3 ± 0,2.

toepassingen

De TSI-test wordt veel gebruikt op het niveau van het microbiologisch laboratorium. Deze test is essentieel voor het soort test dat moet worden toegepast om tot de identificatie van het geslacht en de soort te komen. De goede uitvoering en interpretatie ervan kan materiaal en werk besparen.

Als het resultaat een TSI K / K en cytochroom oxidase test positief is bekend dat de tests voor het identificeren van niet-fermentoren zoals Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia Gramnegatieve bacillen, onder andere genres worden gebruikt. Als negatieve oxidase is gericht op geslacht Acinetobacter, Stenotrophomonas, etc..

Maar als je een TSI A / A te krijgen of K / A en cytochroom oxidase test negatief is, nitraten verder te beperken tot nitrieten, zekerheid hebben dat het een micro-organisme dat behoort tot de familie Enterobacteriaceae. In dit geval zal de identificatieroute gericht zijn op specifieke tests voor deze groep bacteriën.

Bovendien, als een K / A of A / B beeld en cytochroom oxidase-test positief is wordt verkregen, aanvullende proeven te rijden zal strekken om fermenterende stammen die niet tot de familie Enterobacteriaceae, zoals Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio en Pasteurella.

Een TSI met waterstofsulfide, negatieve oxidase, zal de identificatie van de volgende geslachten van de familie Enterobacteriaceae leiden: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella of Salmonella.

Een sulfide TSI laag tot matig waterstof bij basische alkalimetaal- onderste rand en een positieve oxidase oefeningenboek gebruikt voor het identificeren van niet-fermentatieve gramnegatieve staafjes producenten H2S, zoals Shewanella putrefaciens.

Ten slotte kan de TSI worden gebruikt voor het onderzoek naar de productie van waterstofsulfide in Gram-positieve bacillen, vooral wanneer deze wordt vermoed Erysipelothrix rhusiopathiae.

geplant

Het TSI-medium moet worden geïnoculeerd met zuivere kolonies, geïsoleerd in primaire of selectieve kweken. Als de kolonie wordt genomen van selectieve media die zijn bezaaid met monsters met gemengde flora, moet ervoor worden gezorgd dat alleen het oppervlak wordt ingenomen, omdat in het onderste deel van de kolonie in dat medium levensvatbare stammen kunnen worden geremd.

Daarom moet de lus nooit worden gekoeld in een selectief medium om vervolgens de kolonie te nemen en een TSI-medium te inoculeren.

Het planten zal worden gedaan met een rechte lus of naald. Er wordt een lekke band gemaakt, waarbij er op wordt gelet dat deze door het midden van het midden gaat tot de bodem is bereikt en dan is het planten voltooid en wordt het oppervlak zigzag geënt. Doe geen twee lekke banden.

Incubeer bij 37 ° C in aerobio gedurende 18-24 uur. Interpreteer op dit moment, noch voor noch na.

beperkingen

De TSI-test moet worden gelezen tussen 18 en 24 uur incubatie. Een meting voor die tijd kan een vals positief resultaat van fermentatie geven A / A. Overwegende dat een lezing na deze tijd kan leiden tot een vals-negatief beeld van niet-fermentor, als gevolg van de consumptie van peptonen die het medium alkaliseren.

referenties

  1. Mac Faddin J. (2003). Biochemische tests voor de identificatie van bacteriën van klinisch belang. 3e druk Redactioneel Panamericana. Buenos Aires Argentinië.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. 5e druk. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
  4. "TSI-agar." Wikipedia, de gratis encyclopedie. 10 juli 2018, 08:09 UTC. 10 februari 2019, 03:33 Beschikbaar op: en.wikipedia.org
  5. Laboratoria Britania. TSI Agar (Triple suikerijzeragar). 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
  6. BD Laboratories Drievoudige suikerijzeragar (TSI Agar). 2003. Beschikbaar op: bd.com