Heldergroene agar foundation, voorbereiding en gebruik

de heldergroene agar het is een stevig kweekmedium, met een hoge mate van selectiviteit. Het wordt uitsluitend gebruikt voor de isolatie van stammen van het geslacht Salmonella, maar er zijn enkele uitzonderingen, zoals de typhi en paratyphi soorten die niet in dit medium groeien.

De zoektocht naar het geslacht Salmonella komt vaak voor in monsters van feces, water of voedsel. In deze zin kan dit medium erg nuttig zijn. Deze agar werd in 1925 gemaakt door Kristensen, Lester en Jurgens, later aangepast door Kauffmann.

Het bestaat uit pluripeptonas van peptische digest van dierlijk weefsel en alvleesklier verteren caseïne bevat tevens gistextract, natriumchloride, lactose, sucrose, fenolrood, brilliant groen agar.

Het wordt gekenmerkt door een vrij onvriendelijke omgeving vormen voor de meeste bacteriën, het bevorderen van de groei van Salmonella, coliformen maar sommige zijn in staat om te overleven in het, ontwikkelen zwak.

Het is belangrijk om te benadrukken dat in dit medium de Shigella-soort niet groeit en geen van beide Salmonella typhimurium, of Salmonella paratyphi. Daarom, als het gewenst is om deze micro-organismen te isoleren, moeten andere middelen worden gebruikt, zoals XLD-agar, onder andere..

index

• 1 Foundation
  • 1.1 Heldergroene agar
  • 1.2 Varianten van heldergroene agar (BGA)
• 2 Voorbereiding
• 3 Gebruik / toepassingen
• 4 Kwaliteitscontrole
• 5 Referenties

stichting

Heldergroene agar

Elk van de componenten waaruit het medium bestaat, heeft een specifieke functie die de kenmerken en eigenschappen van agar bepaalt.

De pluripeptonas en het extract van gist zijn de voedingsstoffen waaruit de micro-organismen de stikstof en mineralen nemen die nodig zijn voor hun ontwikkeling. Lactose en sucrose zijn energiebronnen voor micro-organismen die in staat zijn om ze te vergisten.

De felgroene is de remmende substantie die de ontwikkeling van Gram-positieve bacteriën en een groot aantal Gram-negatieve micro-organismen voorkomt.

Natriumchloride biedt osmotische stabiliteit aan het medium. Hoewel fenolrood de indicator voor pH is, verandert het in kleur wanneer het de productie van zuren uit de fermentatie van koolhydraten detecteert.

De niet-fermenterende kolonies van lactose en sucrose groeien in dit medium met een witte kleur, roze of transparant, op een rode achtergrond. Bijvoorbeeld bacteriën van het geslacht Salmonella.

Terwijl lactose-fermenterende bacteriën of sucrose in staat zijn te groeien in dit medium, ontwikkelen ze groenachtig gele of groenachtig gele kolonies op een geelgroene achtergrond. Bijvoorbeeld, Escherichia coli en Klebsiella pneumoniae.

Varianten van heldergroene agar (BGA)

Er zijn andere varianten van heldergroene agar; novobiocine groene agar heldere glucose (NBG) en novobiocine agar helder groene glycerol lactose (NBGL).

Novobiocine agar heldergroene glucose (NBG)

Bevat trypticase-soja-agar, ijzer-ammoniumcitraat, natriumthiosulfaat-pentahydraat, fenolrood, glucose, heldergroen, novobiocine en gedestilleerd water.

Dient voor de isolatie van Salmonella-kolonies uit ontlastingsmonsters.

In dit geval zijn fel groen en novobiocine de remmende stoffen die de groei van Gram-positieve bacteriën en sommige Gram-negatieve micro-organismen voorkomen.

Natriumthiosulfaat is de bron van zwavel en ferricitraat de ijzerbron, zowel noodzakelijk om de productie van waterstofsulfide openbaren door de vorming van een zwarte neerslag van ijzer sulfide.

Glucose is het fermenteerbare koolhydraat en het fenolrood is de pH-indicator.

In dit medium ontwikkelen de Salmonella-kolonies zich groot met een zwart centrum omgeven door een roodachtige halo en gevolgd door een duidelijk zichtbaar gebied. Sommige stammen van Citrobacter freundii produceren kolonies identiek aan Salmonella.

Heldergroene novobiocine agar glycerol lactose (NBGL)

Dit medium bevat trypticase-soja-agar, ferriammoniumcitraat, natriumthiosulfaat, lactose, glycerol, heldergroen, novobiocine en gedistilleerd water.

Het verschil van dit medium met het vorige is dat glucose wordt vervangen door lactose en glycerol en fenolrood wordt niet gebruikt.

Het medium wordt ook gebruikt om Salmonella-soorten te isoleren, de kolonies ontwikkelen zich zwart door de productie van waterstofsulfide.

Alleen kolonies die geen zuur produceren uit glycerol of lactose bereiken een H-productie₂Het is genoeg, omdat de lage pH interfereert met de vorming van H₂S. Dit resulteert in kleurloze kolonies voor de meeste Proteus en Citrobacter soorten.

voorbereiding

-Weeg 58 gram van het in de handel verkrijgbare gedehydrateerde medium af. Voeg het toe in een liter dubbel gedestilleerd water. Meng, laat een paar minuten staan ​​en leg het preparaat op een warmtebron totdat het volledig is opgelost.

-Autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C, overschrijd de sterilisatietijd niet.

-Laten staan ​​en zelfs heet serveren in steriele petrischalen. De uiteindelijke pH moet 6,9 ± 0,2 zijn.

-Laat stollen en bewaar in de koelkast tot gebruik. Voor het planten moeten de platen op kamertemperatuur komen.

-Het poedermedium is groen en klaar om een ​​oranjebruine of roodachtig groene kleur te krijgen, afhankelijk van de pH en het commerciële huis. Een zeer bruine kleur is indicatief dat de agar oververhit was.

-Zodra de agar gestold is, wordt het niet aanbevolen om opnieuw te hakken, omdat het medium achteruitgaat.

Gebruik / toepassingen

Dit medium wordt onder meer gebruikt voor het opzoeken van stammen van het geslacht Salmonella uit ontlastingmonsters en zuivelproducten..

Omdat het een nogal onherbergzame omgeving is, is het raadzaam om een ​​overvloedig inoculum te planten als het directe monster wordt gebruikt. Anders moeten de voorverrijking en verrijking van de monsters worden gedaan voordat ze in dit medium worden geplant.

Aangezien sommige stammen van Salmonella geremd zijn of moeilijk groeien, is het raadzaam dit medium met andere selectieve agars voor Salmonella te begeleiden..

Alle kolonie met karakteristieke Salmonella moet worden onderworpen aan biochemische tests voor definitieve identificatie.

Kwaliteitscontrole

Om de goede werking van het felgroene agarmedium te testen, kunnen ATCC-stammen worden gebruikt om de ontwikkeling van hetzelfde daarop te observeren..

De meest voorkomende soorten die worden gebruikt voor kwaliteitscontrole zijn: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

De eerste 3 moeten roze of transparant witte kolonies op een rode achtergrond geven. Salmonella met goede ontwikkeling en Proteus met schaarse of regelmatige groei.

Klebsiella en Escherichia worden verwacht geelachtig gele kolonies met gele achtergrond en in het geval van Shigella en Staphylococcus moet worden geremd.

Het gedehydrateerde medium moet worden bewaard bij kamertemperatuur, op een droge plaats, omdat het medium erg hygroscopisch is.

referenties

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratory S.A. Briljant groen agar. 2009
2. British Laboratory Heldergroene Agar. 2015.
3. BD-laboratorium. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5de ed.). Argentinië, redactie Panamericana S.A..
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Argentinië. Panamericana S.A Editorial