Vogel-Johnson Agar foundation, bereiding en toepassingen

de Vogel-Johnson-agar is een vast, selectief en differentieel kweekmedium, speciaal geformuleerd voor de isolatie van Staphylococcus aureus. Dit medium is in 1960 gecreëerd door Vogel en Johnson uit de modificatie van glycine telluriet agar geformuleerd in 1955 door Zebovitz, Evans en Niven.

De modificatie bestond uit het verhogen van de concentratie van mannitol die in het medium aanwezig is en de opname van een pH-indicator. De huidige formule is samengesteld uit tripteïne, gistextract, mannitol, dikaliumfosfaat, lithiumchloride, glycine, fenolrood, agar, 1% kaliumtellurietoplossing en water.

Opgemerkt moet worden dat er andere middelen zijn die, zoals Vogel-Johnson agar, selectief zijn voor de isolatie van S. aureus, zoals gezouten mannitol-agar en Baird Parker-agar. In deze zin zou kunnen worden gezegd dat de basis van Vogel-Johnson-agar een mengsel is tussen zoute mannitol-agar en Baird Parker-agar..

In de eerste de kolonies van S. aureus Ze onderscheiden zich door mannitol te vergisten en de pH-indicator geel te maken. Aan de andere kant, in de tweede de S. aureus het wordt gekenmerkt door het verminderen van telluriet tot tellurium en het vormen van grijze tot zwarte kolonies. Beide eigenschappen worden waargenomen in Vogel-Johnson-agar.

Dit medium is, net als zijn tegenhangers, nuttig voor de detectie van Staphylococcus aureus in voedselmonsters, sanitaire controles van industriële producten en in klinische monsters.

index

• 1 Foundation
  • 1.1 Bijdrage van voedingsstoffen
  • 1.2 Selectieve kracht
  • 1.3 Differentiële kracht
  • 1.4 Osmotische balans en stollingsmiddel
• 2 Voorbereiding
  • 2,1 1% m / v kaliumtellurietoplossing
  • 2.2 Vogel-Johnson-agar-basismedium
• 3 Gebruik
• 4 Kwaliteitscontrole
• 5 Referenties

stichting

Bijdrage van voedingsstoffen

Het Vogel-Johnson-medium bevat tripteïne en gistextract; beide stoffen leveren lange keten-aminozuren die dienen als koolstof- en stikstofbronnen die nodig zijn voor bacteriegroei. Bacteriën die in dit medium kunnen groeien, nemen de voedingsstoffen uit deze stoffen.

Selectieve kracht

Vogel-Johnson-agar is in staat om de groei van Gram-negatieve bacteriën en zelfs enkele Gram-positieve bacteriën te remmen, wat de ontwikkeling van coagulase-positieve stafylokokken begunstigt. De remmende stoffen zijn kaliumtelluriet, lithiumchloride en glycine.

Differentiële kracht

De stoffen die dit differentiële medium maken zijn mannitol en kaliumtelluriet. Mannitol is een koolhydraat en wanneer het wordt gefermenteerd, worden er zuren geproduceerd die het medium van rood naar geel veranderen, wat gebeurt dankzij de aanwezigheid van de fenolrode pH-indicator.

Terwijl het kleurloze telluriet gereduceerd tot metallisch vrij telluride, neemt het een donkergrijze tot zwarte kleur aan.

de Staphylococcus aureus fermenteert mannitol en vermindert telluriet tot tellurium. Dat is waarom de typische kolonies van S. aureus in dit medium zijn ze grijs of zwart omgeven door een geel medium.

Bacteriën die in dit medium groeien en geen telluriet of ferment mannitol verminderen, zullen transparante kolonies vormen omgeven door een rood medium, zelfs intenser dan de oorspronkelijke kleur, vanwege de alkalinisatie van het medium door het gebruik van peptonen..

Aan de andere kant zullen bacteriën die telluriet verminderen maar geen mannitol fermenteren, groeien als grijze of zwarte kolonies omgeven door een dieprode kleur.

Als het medium werd bereid zonder de toevoeging van kaliumtelluriet, de kolonies van S. aureus ze zouden zich ontwikkelen als gele kolonies, omgeven door een geel medium, zoals in zoute mannitol-agar.

Osmotische balans en stollingsmiddel

Dipaliumfosfaat handhaaft de osmotische balans van het medium en stelt de pH in op neutraal 7.2. Terwijl de agar een vaste consistentie geeft aan het kweekmedium.

voorbereiding

1% kaliumtellurietoplossing w / v

Deze oplossing is niet inbegrepen in het gedehydrateerde medium, omdat het niet kan worden gesteriliseerd in een autoclaaf. Om deze reden wordt het afzonderlijk bereid en toegevoegd aan het gesteriliseerde medium.

Sommige commerciële huizen verkopen kant-en-klare 1% kaliumtellurietoplossing. Als u zich in het laboratorium wilt voorbereiden, gaat u als volgt te werk:

Weeg 1,0 g kaliumtelluriet af en meet 100 ml gedestilleerd water. Los het telluriet van kalium op in een deel van het water en voltooi dan de hoeveelheid water totdat u 100 ml bereikt. Steriliseer de oplossing volgens de filtratiemethode.

Vogel-Johnson-agar-basismedium

Weeg 60 g van het gedehydrateerde medium af en los het op in 1 liter gedestilleerd water. Het mengsel wordt verwarmd tot koken om te helpen bij volledige oplossing. Tijdens het oplossingsproces wordt het medium vaak geagiteerd.

Steriliseren in een autoclaaf bij 15 pond druk en 121 ° C gedurende 15 minuten. Verwijder uit de autoclaaf en laat staan ​​tot het medium een ​​temperatuur van ongeveer 45 tot 50 ° C bereikt. Voeg 20 ml van de eerder bereide kaliumtellurietoplossing toe tot 1%.

Meng en giet in steriele petrischalen. Laat stollen en bestel omgekeerd in plaquers voor latere opslag in de koelkast tot gebruik.

De uiteindelijke pH van het bereide medium moet 7,2 ± 0,2 zijn.

Wacht voordat u een monster plant, totdat de plaat de omgevingstemperatuur heeft bereikt.

De kleur van het geprepareerde medium is rood.

gebruik

Hoewel het kan worden gebruikt voor de isolatie van S. aureus in elk type monsters wordt het meestal gebruikt voor de microbiologische analyse van farmaceutische producten, cosmetica en voedsel.

Het wordt aanbevolen dat het inoculum dicht is. Het zaaien kan worden uitgevoerd door striation met een platina-hendel of door een oppervlak met Drigalski-spatel.

De platen worden gedurende 24 tot 48 uur bij 35-37 ° C geïncubeerd in aerobiose.

Kwaliteitscontrole

Voor de kwaliteitscontrole van het Vogel-Johnson-medium kunnen de volgende controlestammen worden gebruikt:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 of Proteus mirabilis ATCC 43071.

Het verwachte resultaat is als volgt: voor de stammen van S. aureus Bevredigende groei met zwarte kolonies omgeven door geel medium. naar S. epidermidis regelmatige groei met doorschijnende of zwarte kolonies omgeven door rood medium.

Evenzo, voor E. coli er wordt verwacht dat er totale remming zal zijn, en voor Proteus mirabilis gedeeltelijke of totale remming; als het groeit, zal het met mate doen en de kolonies zwart worden omringd door een middelrode kleur.

referenties

1. BD Laboratories. VJ (Vogel en Johnson Agar). 2006. Beschikbaar op: bd.com
2. Laboratoria Britania. Vogel- Johnson Agar. 2015. Beschikbaar op: britanialab.com
3. Laboratoria Britania. Potassium telluriet. 2015. Beschikbaar op: britania.com
4. Himedia-laboratorium. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Beschikbaar op: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel- Johnson Agar Base. Merck Microbiology Manual. 12e editie, pp 502-503. Beschikbaar in: Gebruikers / Team / Downloads
6. Medewerkers van Wikipedia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipedia naar encyclopedische livre,   disponível em: wikipedia.org.
7. Venezolaanse standaard Covenin 1292-89. (1989). Food. Isolatie en tellen Staphylococcus aureus. Verkrijgbaar in:sencamer.gob.ve