Negatieve kleuringfundering, techniek, voor- en nadelen

de negatieve kleuring Het is een speciale kleurmethode om vooral de aanwezigheid van de capsule in sommige micro-organismen te benadrukken Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae en Cryptococcus neoformans-, van klinische monsters of zuivere culturen.

Het directe monster dat gewoonlijk wordt gebruikt om negatieve kleuring aan te brengen, is het hersenvocht. Deze techniek vormt een snel alternatief voor de vermoedelijke diagnose van meningitis, in het bijzonder Cryptococcus neoformans.

Evenzo kan deze kleuring worden toegepast op sputum en steriele vloeistoffen in het algemeen, evenals op stammen verkregen uit jonge zuivere culturen. Deze techniek gebruikt nigrosine of Chinese inkt voor de uitvoering ervan; daarom is het een zeer eenvoudige en economische methodologie om toe te passen die in korte tijd informatie met een grote diagnostische waarde oplevert.

In deze zin is elk laboratorium in staat om deze kleuring uit te voeren. Natuurlijk moet het laboratorium beschikken over bekwaam personeel dat in staat is om de gisten van de Cryptococcus neoformans geïsoleerd of ontluikend en differentiëren ze van leukocyten en artefacten die het monster kan bevatten.

index

• 1 Foundation
• 2 Techniek
  • 2.1 Materialen
  • 2.2 Specificaties voor bemonstering
  • 2.3 Uitvoering van de techniek met directe monsters
  • 2.4 Uitvoering van de techniek met cultuurstammen
  • 2.5 Observatie in een microscoop
• 3 voordelen
• 4 Nadeel
• 5 Weefselkleuring met Oost-Indische inkt
• 6 Referenties

stichting

Nigrosine en Indische inkt werken op een vergelijkbare manier; daarom kan een van de twee stoffen onderling uitwisselbaar worden gebruikt.

Deze techniek wordt negatieve kleuring genoemd omdat deze in strijd is met de rest van de kleurtechnieken. In dit wat onbezoedigd blijft, is de structuur die wordt gezocht of die je wilt zien; dat wil zeggen, de micro-organismen.

Daarom is de kleuring gebaseerd op het verven van de smeerbodem in een donkere kleur. In dit scenario worden de afgedekte structuren gemarkeerd in lichte of kleurloze kleuren.

Over het algemeen worden de gisten refractiemiddel geobserveerd, omgeven door een heldere halo die overeenkomt met de capsule. Dit komt omdat Chinese inkt en nigrosine stoffen zijn die niet in het polysaccharide kunnen dringen dat de capsule vormt van levende micro-organismen.

Het is vermeldenswaard dat andere structuren die aanwezig kunnen zijn in het directe monster, zoals leukocyten of rode bloedcellen, niet penetreren.

Nu, als de micro-organismen worden gedood, kan de kleurstof door te dringen in hen, waardoor deze vlekken is ook nuttig voor de beoordeling van de levensvatbaarheid van de micro-organismen.

techniek

materialen

nigrosine

De nigrosine dankt zijn naam aan de zwarte kleur die hij heeft. Het is een synthetische substantie verkregen door het mengsel van dergelijke organische verbindingen zoals nitrobenzeen, aniline en aniline hydrochlorite gebruik van een katalysator in de reactie (ijzer of koper).

Chinese inkt

Chinese inkt is een stof die voornamelijk door Aziaten wordt gebruikt voor het schrijven, het maken van kunstwerken en monochrome schilderkunst. Het is erg populair in de Chinese cultuur.

Het wordt verkregen uit inktvisinkt vermengd met verpulverde steenkool, product van het verbranden van kleine harsachtige bomen.

Het is ook mogelijk om roet te bereiden uit de verbranding van koolwaterstoffen (plantaardige oliën), samen met een eiwit dat de gelatine geschikte consistentie om precipitatie van de koolstofdeeltjes te voorkomen geeft.

Specificaties voor bemonstering

- Vereist niet.

- Het monster van CSF, sputum of steriele vloeistof moet ten minste 1 ml volume bevatten en moet onmiddellijk in het laboratorium worden overgebracht naar kamertemperatuur.

- CSF- en steriele vloeistofmonsters moeten worden genomen door een gespecialiseerde arts.

- Het kan ook een zuivere kweek zijn van een verdachte stam die is gekoppeld aan de hiervoor genoemde pathogenen.

Uitvoering van de techniek met directe monsters

- De monsters moeten worden gecentrifugeerd, vervolgens wordt het supernatant weggegooid en wordt het bezinksel afgenomen.

- Een druppel gecentrifugeerd materiaal (sediment) en een druppel Chinese inkt of nigrosine worden op een schone glijbaan gelegd..

- Het moet goed worden gemengd en bedekt met een dekglaasje, waardoor de druppel zich als een dunne film kan uitspreiden zonder de randen te overschrijden.

- Vervolgens wordt de bereiding in de microscoop gemonteerd.

- Als het preparaat te donker is, kan het worden verdund met water.

Uitvoering van de techniek met stammen uit de cultuur

- Een heel klein deel van een jong gewas wordt genomen met een zaaidraad en opgelost in een druppel Chinese inkt die eerder op een schone glijbaan was geplaatst.

- Er is een dekglaasje op geplaatst.

- Het wordt waargenomen in de microscoop op 10X en vervolgens op 40X.

Je kunt ook een deel van de kolonie oplossen in gedistilleerd water en van daaruit een druppel nemen en het mengen met de inkt. Op deze manier zal de voorbereiding niet zo dik zijn, waardoor het mogelijk is om de structuren geïsoleerd te observeren; Als er agglomeraties zijn, zal deze niet goed worden waargenomen.

Een andere methode is de volgende:

- Plaats een druppel van de cultuur in suspensie aan het ene uiteinde van de dia.

- Plaats een druppeltje nigrosine aan dezelfde kant en meng.

- Verdeel, met behulp van een andere dia, het monster alsof u een hematologisch uitstrijkje maakt.

- Laten drogen en onder de microscoop observeren.

Observatie in een microscoop

Eerst moet je focussen met een 10X-doelstelling om een ​​breed beeld van het veld te hebben. Vervolgens zou je moeten zoeken of er vrije ruimtes zijn; als dat zo is, focus je met 40X om de details te zien.

voordeel

- Het is gemakkelijk uit te voeren.

- Het is een economische techniek.

- Deze methode vereist niet dat het uitstrijkje wordt bevestigd aan warmte of chemicaliën; daarom worden micro-organismen waargenomen zonder vervormingen.

- Het verse preparaat hoeft niet te worden gedroogd, zodat het onmiddellijk kan worden waargenomen, waardoor snel resultaten worden gegenereerd.

nadeel

Eenmaal geassembleerd, moeten de verse preparaten onmiddellijk in acht worden genomen; Als ze mogen drogen, is het niet langer mogelijk om ze te observeren en een nieuwe.

Weefselkleuring met Oost-Indische inkt

Een andere functie die Chinese inkt kan vervullen, is in de pathologielaboratoria. Dit wordt toegepast op weefselmonsters die chirurgisch zijn verwijderd om de marges van tumorresectie te markeren.

Het gemarkeerde weefsel wordt besproeid met azijnzuur. Dit werkt als bijtmiddel en voorkomt dat de inkt loskomt wanneer het weefsel wordt onderworpen aan routinematige verwerking voor de biopsievoorbereiding.

De procedure bestaat uit het baden van het weefsel in alcohol en xyleen, en vervolgens het opzuigen in paraffinewas. Deze markering begeleidt de patholoog bij het waarnemen van het weefsel en geeft aan waar de marge van chirurgische resectie of een ander aandachtspunt is.

referenties

1. "Nigrosine". Wikipedia, de gratis encyclopedie. 11 juli 2017, 22:46 UTC. 6 januari 2019, 16:56 uur: en.wikipedia.org
2. "Chinese inkt". Wikipedia, de gratis encyclopedie. 1 oktober 2018, 03:08 UTC. 6 januari 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J en medewerkers. (2006). Arbeidskrachten van de autonome gemeenschap Extremadura. Specifieke agenda Volume IV. Redactie MAD. Sevilla-Spanje, pp 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006), gespecialiseerde laboratoriumtechnicus van de Galicische gezondheidsdienst (SERGAS). Specifieke inhoud van de stof 2. Redactie MAD. Sevilla-Spanje, pp 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Microbiologische diagnose van Bailey & Scott. 12 ed. Argentinië. Panamericana S.A Editorial